U6嵌合型抗caspase-3核酶的体外及体内活性鉴定

【摘要】 为探讨ｃａｓｐａｓｅ－３基因在细胞凋亡中的作用，及不同表达核酶的载体在体内的 表达效果，本研究对比了３种表达核酶的真核质粒，包括 ＲＮＡ聚合酶Ⅱ启动的 ｐｌ．５ＲＺ１０７（自我剪切）和ｐＲＺ１０７及ＲＮＡ聚合酶Ⅲ启动的嵌合于Ｕ６中的ｐＵ６ＲＺ１０７在 体外和在肝细胞ＢＲＬ－３Ａ内的活性，以期获得细胞内切割活性较高的的核酶载体方面 的信息．结果显示，具有自我剪切功能的质粒ｐ１．５ＲＺ１０７在体外切割靶ＲＮＡ的效率最 高，几达８０％；而体内ｃａｓｐａｓｅ－３在ＲＮＡ，蛋白水平及蛋白功能活性上均显著下降，证明 核酶在体内均可有效地表达并切割底物，以ｐＵ６ＲＺ１０７切割效率最高，约达６５％， ｐＲＺ１０７次之，ｐｌ．５ＲＺ１０７最低．结果表明，Ｕ６嵌合型核酶ｐＵ６ＲＺ１０７体内可有效地表 达核酶及下调靶ＲＮＡ水平，这不仅为探讨ｃａｓｐａｓｅ－３在凋亡途径中的作用，也可为今后 的基因治疗提供研究基础．更多还原