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梅毒螺旋体抗原基因的克隆、表达及其在临床检验中的应用

Cloning and expression of Treponema pallidum and application on the clinical detection

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【作者】 孙峥嵘孙皓鲁润铭李鲁平郑志红李淑琴张兆山

【Author】 SUN Zhengrong, SUN Hao, LU Runming, et al. Central Laboratory, Shenyang Infection Hospital, Shenyang, P.R.China Corresponding author: SUN Zhengrong, Central Laboratory, Shenyang Infcetion Hospital, Shenyang 110006, P.R.China

【机构】 沈阳市传染病院中心研究室北京军事医学科学院生物工程研究所

【摘要】 目的 克隆、表达并纯化梅毒螺旋体相对分子质量为 47× 10 3 抗原 ,并检测梅毒患者的血清标本。方法 应用基因扩增技术分离此蛋白的全长基因 ,采用基因工程的方法 ,应用融合表达载体pGEX 2T ,重组、克隆得到带有梅毒螺旋体 47× 10 3 特异性抗原基因的重组菌株 ,经大肠杆菌表达系统获得重组融合蛋白。再经亲和层析获得纯品 ,并联合应用ELISA检测梅毒患者的血清标本 30份 ,同时检测非梅毒患者的血清标本 30份。结果 纯化后获得了梅毒螺旋体相对分子质量为 47× 10 3 的特异性抗原。ELISA检测梅毒患者血清结果均阳性。非梅毒患者血清均阴性 ,无非特异性交叉反应。结论 此项方法具有操作简便、准确的特点 ,为临床检测梅毒开辟了新的领域

【Abstract】 Objective To study the expression and antigenicity of Treponema pallidum (Tp) outer membrane protein Mr47×10 3. Methods Treponema pallidum outer membrane gene was amplified from the complete genome by PCR, and cloned in the pGEX 2T fused expression vector. Transformed in E.coli , the fused expression vector with Treponema pallidum Mr47×10 3 genome in E.coli was formed. The fusion protein were generated by E.coli fused expression system and purified with affinity chromatography. Correlation with ELISA showed: 30 serum samples of Tp patients were positive, and 30 serum samples of non Tp patients were negative. Results The purified Treponema pallidum Mr47×10 3 antigen could be applied to detect antibody of Tp patients. Conclusion The recombinant of E.coli will be of value for clinical detection of Treponema pallidum.

  • 【文献出处】 中华微生物学和免疫学杂志 ,CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY , 编辑部邮箱 ,2000年02期
  • 【分类号】R446.61
  • 【被引频次】20
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