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胃内肠嗜铬样细胞的分离与培养及功能测定

IIsolation and culture of enterochromaffin like cell and its functionaldetermination

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【作者】 缪锟孙亮Tang LHModlin IM

【Author】 MIU Kun ,SUN Liang ,TangLH ,etal. DepartmentofGastroenterology ,TheFirstAffiliatedHospitalofNanjingMedicalUniversity ,Nanjing 2 10 0 2 9,China

【机构】 南京医科大学第一医院消化科美国耶鲁大学医学院外科系

【摘要】 目的 体内研究已提示胃内肠嗜铬样 (ECL)细胞在调节胃酸分泌中起到重要的作用。但以往由于缺乏分离、培养ECL细胞的方法 ,对它的生理调节、病理变化的研究受到了限制。方法 采用链霉蛋白酶的消化 ,淘析法和颗粒梯度离心分离纯化ECL细胞。结果 经电镜 ,组胺含量测定 ,纯化率达 90 %~ 95 %。经锥虫蓝染色细胞成活率大于 95 %。分离纯化后的ECL细胞短期培养 2 4h后 ,胃泌素对ECL细胞的作用 ,经酶标免疫测定组胺分泌的EC50 为 3× 10 -10 mol/L。经BrdU掺入试验测定DNA增生的EC50 为 2× 10 -11mol/L。胃泌素受体拮抗剂L3652 66抑制胃泌素释放组胺的作用 (IC50 10 -8mol/L)。结论 ECL细胞在培养系统中生长良好 ,为进一步研究ECL细胞提供了一个可靠的新方法

【Abstract】 Objective Invivostudieshavesuggestedanimportantroleforgastricenterochromaffin like (ECL)cellinmediatingacidsecretion .ThefurtherstudyofECLcellinitsphysiologicalfunctionand pathologicalchangehasbeenlimitedsincenopurepreparationandculturesystemwereavailable .Methods ThepurposeofthisstudyistodevelopapureisolatedECLcellpreparationanditsculturesystem .ECLcell wasisolatedbypronaseandpurifiedbyacombinationofelutriationanddensity gradientcentrifugation .En richmentwasdeterminedbytotalhistaminecontentandelectronmicroscope .Intheculturesystemfor 2 4 hoursthefunctionofECLcellwasdeterminedbydosedependentgastrinstimulatedhistaminesecretionand DNAsynthesis.Results ThepurityofECLpreparationwas 90 %~ 95 % .Trypanblueexclusiondemon strated >95 %viability .Histaminesecretionismeasuredbyenzymeimmunoassay .Basalsecretionwas (0 .6 ± 0 .2 )nmol/ 10 3cell.GastrinstimulatedhistaminesecretionwithEC50 of 3× 10 -10 mol/Landwasinhibited bypretreatmentofgastrinreceptorantagonistL3652 66,(IC50 10 -8mol/L) .TheDNAsynthesisofECLcell wasdeterminedbyBrdU .GastrinstimulatedECLcellDNAsynthesiswithEC50 of 2× 10 -11mol/L . ConclusionAboveresultsindicatedthatECLcellcouldlivewellinculturesystemandprovideagoodmeansfor investigatingcentralroleofECLcellfunction .

【关键词】 肠嗜铬样细胞分离培养
【Key words】 Enterochromaffin like cellIsolationCulture
  • 【文献出处】 中华消化杂志 ,Chinese Journal of Digestion , 编辑部邮箱 ,2000年06期
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