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RevTet-On系统调控血小板生成素基因表达的研究  
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【英文篇名】 Using RevTet-On System to Control Thrombopoietin Gene Expression
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【作者】 魏旭东; 伏爽; 藏维平; 武莎莎; 王申五; 王德炳;
【英文作者】 WEI Xudong FU Shuang ZANG Weiping WU Shasha WANG Shenwu WANG Debing (Institute of Hematology; People′s Hospital; Peking University Beijing 100044);
【作者单位】 北京大学人民医院; 血液病研究所; 血液病研究所 北京;
【文献出处】 中国实验血液学杂志 , Journal of Experimental Hematology, 编辑部邮箱 2000年 04期  
期刊荣誉：中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 RevTet-On系统; 血小板生成素; 基因表达; NIH3T3细胞;
【英文关键词】 RevTet-On system thrombopoietin gene expression NIH3T3 cells;
【摘要】 本研究应用RevTet On基因表达系统 ,通过四环素衍生物强力霉素 (doxcycline ,Dox)调控血小板生成素 (TPO)基因在NIH3T3细胞中的表达。首先应用基因重组技术构建含TPO基因的重组质粒 pRevTRE/TPO ,然后将RevTet On基因调控系统的pRevTet On和 pRevTRE/TPO分别转染PT67细胞 ,从而包装RevTet On和RevTRE/TPO重组逆转录病毒 ,同时将此两种病毒感染NIH3T3细胞 ,建立整合入RevTet On和RevTRE/TPO逆转录病毒的阳性细胞株 (RevTet On3T3/TPO)。通过Dox调节TPO基因在此细胞株中表达 ,培养基中加入 2mg/LDox或不加Dox ,然后用RT PCR ,Western印迹和ELISA方法检测TPO基因表达情况。结果发现 ,RevTet On3T3/TPO当培养基中不加Dox时用RT PCR和Western印迹检测未见TPO表达 ,用ELISA检测表达TPO量低 ;在培养基中加入Dox时 ,RT PCR和Western印迹检测可见TPO表达 ,且TPO表达量高 ,为不加Dox时的 91倍。本实验表...
【英文摘要】 For the purpose of thrombocytopenia gene therapy, recombinant RevTet-On and pRevTRE/TPO retrovirus were packaged and transfected to NIH3T3 after selected with G418 and hygromycin, the two inserting recombinant retrovirus cell strain RevTet-On3T3/TPO were established. TPO expression was controlled and regulated by doxycydine(Dox). After using Dox to control the expression of TPO in RevTet-On3T3/TPO cells, the result showed that when Dox is added to the RevTet-On3T3/TPO cells, cell populations expressed TPO h...
【分类号】 R346
【正文快照】 1996年Paulus等[1] 构建了逆转录病毒的四环素调控系统 ,该系统在四环素及其衍生物的作用下 ,可调节目的基因的定量表达。由于其载体是逆转录病毒 ,因此表达效率较高 ,国外已用于对红细胞生成素 (EPO)的研究。关于血小板生成素 (TPO)的基因治疗 ,国内外却尚未见这方面的报道。?

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