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新型大肠杆菌裂解系统在重组蛋白回收中的应用(英文)  
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【英文篇名】 The Application of a Novel Lytic System to the Recovery of Recombinant Proteins in E.coli
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【作者】 杨运桂; 童芹; 胡泰山; 钱友存; 杨胜利; 龚毅;
【英文作者】 YANG Yun Gui; TONG Qin; HU Tai Shan; QIAN You Cun; YANG Sheng Li; GONG Yi * ( Shanghai Research Center of Biotechnology; Shanghai Institutes for Biological Sciences; the Chinese Academy of Sciences; Shanghai 200233; China );
【作者单位】 中国科学院上海生命科学研究院上海生物工程研究中心; 中国科学院上海?;
【文献出处】 生物化学与生物物理学报 , ACTA BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA SINICA, 编辑部邮箱 2000年 03期  
期刊荣誉:中国期刊方阵  CJFD收录刊
【中文关键词】 大肠杆菌; T4溶菌酶; 裂解系统; 重组蛋白; β-半乳糖苷酶;
【英文关键词】 E.coli; T4 lysozyme; lytic system; recombinant protein; β galactosidase;
【摘要】 溶菌酶通过降解细菌细胞壁的肽聚糖裂解细菌 ,利用此特性 ,构建温度敏感的内源裂解系统 ,达到高效释放和回收重组蛋白的目的。构建了温度敏感的T4溶菌酶基因表达质粒 pSC lys(pSC10 1复制子 )和p15A lys(p15A复制子 ) ,质粒与工程菌构成了新型内源裂解系统 ,该系统可以与高拷贝复制子 (如 pMB1,ColE1)的重组蛋白表达质粒兼容。结果表明 ,裂解系统的最适裂解条件由三个要素构成 :pSC lys 工程菌、2~ 5倍浓缩培养物、裂解缓冲液 (2mmol/LEDTA ,5 0mmol/LTris HCl,pH 8.0 )。在最适裂解条件下 ,胞液 β 半乳糖苷酶 ,重组蛋白分子伴侣GroEL及ZZ融合鲑鱼降钙素六聚体均能简单、迅速、定量地释放到裂解液上清 ,两种重组蛋白的表达量均能维持原来的表达水平。此系统可以代替传统的菌体裂解方法 ,在重组蛋白纯化前的回收方面具有较大的应用价值。
【英文摘要】 In order to efficiently recover recombinant proteins, a temperature sensitive lytic system was constructed on the basis of the feature that T4 lysozyme disrupts the bacteria through cutting specific bond in the peptidoglycan layer of cell wall. This system was evaluated by constructing and introducing a low copy plasmid pSC lys (pSC101 replication origin) into E.coli . The plasmid contained a temperature sensitive T4 lysozyme (LYS ts ) gene under the control of three tandem tac promoter...
【基金】 国家高技术“863”计划资助项目!No .10 2 11 0 2 0 1&&
【分类号】 R378.21
【正文快照】 Beforepurification ,thereleaseofrecombinantproteinsinE .coliwasroutinely performedbysonication ,French press ,glassgrinding ,detergen?

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