圈卷产色链霉菌分化基因sawB的结构与功能

【摘要】 以 Ｓａｎ３ＡＩ部分酶切野生型圈卷产色链霉菌７１００（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓａｎｓｏｃｈｒｏｍｏｓｅｎｅｓ ７１００）染色体 ＤＮＡ，回收 ３～ ６ ｋｂ的 ＤＮＡ片段，插入到链霉菌表达载体 ｐＩＪ７０２的 ＢｇｌⅡ 位点，转化圈卷产色链霉菌白色突变株Ｗ１９，得到了近３ ０００个转化子，从中筛选到了 两个具有硫链丝菌素抗性和野生型灰色表型的转化子．进行了质粒提取和酶切分析， 两个重组质粒分别命名为 ｐＮＬ－１和 ｐＮＬ－２（分别含有约 ５．２和 ５．８ ｋｂ的外源片段）．通过 亚克隆及突变株互补实验，将互补ｗ１９的基因定位在了１．２５比的Ｐｓｔ１一Ａｐａ１片段上． ＤＮＡ序列分析结果表明，该ＤＮＡ片段中含有一个完整的可读框（ＯＲＦ１），编码一个由 ２９５个氨基酸组成的蛋白质，该基因命名为ｓａｗＢ．利用Ｂｌａｓｔ程序在蛋白数据库中比较 发现，ＳａｗＢ与天蓝色链霉菌的一个转录调控蛋白ＷｈｉＨ具有８１％的一致性．利用基因 破坏策略研究了ｓａｗＢ的功能，结果发现，野生型菌株的ｓａｗＢ基因破坏后，丧失了孢子 形成能力，由灰色表型转变为白色表型．显微镜下观察ｓａｗＢ突变株的气生菌丝长而直， 顶部略有波浪形卷曲，螺旋程度有所下降．由此可知，ｓａ更多还原