丙型肝炎病毒E2蛋白在大肠杆菌中的表达及初步纯化

【摘要】 ＨＣＶＥ２抗体在慢性ＨＣＶ感染中有较高的检出率（８０％～９７％），与病毒血症密切相关，抗体滴度与病毒复制、ＨＣＶＲＮＡ的滴度相关。本研究在大肠杆菌中高效表达了ＨＣＶＥＺ蛋白，并进行了蛋白的初步纯化。用分子克隆技术，将ＨＣＶＥ２基因连接到非融合蛋白的原核表达载体ＰＫＫ２２３－３上，并转化大肠杆菌，经扩大培养，提取质粒进行酶切鉴定而获得含有Ｅ２基因的阳性克隆（ｐＫＫＥ２）。挑取Ｅ２阳性克隆单个苗落接种于１ｍｌ培养基中，３７℃振摇培养，细菌生长至对数生长期时，加入ＩＰＴＧ诱导Ｅ２蛋白表达５小时。离心去上清后，加入１×ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上样液１００μｌ，沸水中煮５分钟，上样进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，转膜更多还原