霍乱毒素突变体和福氏2a asd基因缺失突变体的构建

【摘要】 痢疾疫苗的研究是全世界都在关注的课题之一，目前痢疾疫苗研究的主要方向是构建减毒的活菌苗；但作为活菌苗，其安全性与有效性之间的矛盾很难协调，因此至今还没有很好的痢疾疫苗问世。至今普遍认为痢疾菌苗应该具有一定的侵袭力才行，本研究室曾用野生型福氏２ａ２４５７Ｔ作出发菌株，构建了ａｒｏＡ缺失突变体（ＲＭ２６）；该突变体在豚鼠眼角膜试验中呈阴性，但仍具有侵袭Ｈｅｌａ细胞的能力。本文在此基础上，构建其染色体ａｓｄ基因全缺失的突变体，为用载体／宿主平衡致死系统构建具有侵袭力的多价痢疾菌苗做好了准备。首先，检定出有毒的野生型霍乱弧菌，从中扩增得到霍乱毒素（ＣＴ）基因；然后用体外定点诱变技术将其６３位丝氨酸改为更多还原