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人胎脑中干扰素诱导基因1-8家族cDNA的克隆

The Cloning of Interferon-Inducible 1-8 Gene Family

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【作者】 黎旭; 赵崇; 张镜宇;

【Author】 Li Xu, Zhao Chong, Zhang Jingyu (Tianjin Institute of Endocrinology, Tianjin Medical University 300070)

【机构】 天津医科大学内分泌研究所; 天津医科大学内分泌研究所 300070; 300070; 300070;

【摘要】 研究干扰素及干扰素诱导蛋白的基因表达在脑发育中的变化。(1)利用基因工程技术克隆了诱导蛋白1-8家族基因,主要步骤为自未经干扰素处理的胎脑中提取总RNA,经Oligo(dT)-纤维素拉分离纯化出poly(A)~+RNA。(2)用RT-PCR法扩增出干扰素诱导的1-8基因家族成员保守区的cDNA片段,即已知的3个成员1-8U、1-8D和9-27的同源序列。将此扩增出的 CDNA片段克隆入pUC18的SmaI和 EcoRI位点之间得重组质粒。用双脱氧末端终止法测定了插入片段的全部核苷酸顺序,证明其长度为186 bp,与家族中3个功能性成员基因1-8U、1-8D和9-27基因相应片段的同源性分别为100%、98%和96.7%。深入的研究工作有待继续。

【Abstract】 Total RNA from fetal brain tissue was extracted with the acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform (AGPC) single-step method. Poly(A)~+ RNA was isolated and purified through packed column containing oligo-(dT) cellulose. The consensus sequence of interferon-inducible 1-8 gene family was amplified by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) method with the template of fetal brain poly(A)~ + RNA. The cDNA fragment was cloned into pUC18 plasmid which was digested with Sma I and EcoR I. Nucleotide sequence of the cDNA fragment was determined by dideoxy- nucleotide chain-termination method. The sequence is in accordance with there reported by other authors.

【基金】 天津市医学重点攻关项目基金
  • 【文献出处】 天津医药 ,Tianjing Medical Journal , 编辑部邮箱 ,1999年10期
  • 【分类号】Q785
  • 【被引频次】2
  • 【下载频次】24
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