直接基因转移治疗老年痴呆模型大鼠的实验研究

【摘要】 <正> 为解决脑源性神经营养因子(BDNF)治疗老年痴呆的给药途径问题,探讨BDNF在防治老年痴呆方面的作用,本研究将人类带前导肽的BDNF全长基因克隆人逆转录病毒高效表达载体pLNCX,得到正确的重组质粒 pBDNF-LNCX.用改进的磷酸钙介导细胞转染法将该质粒导入到包装细胞PA317,得到产生高滴度复制缺陷性逆转录病毒的包装细胞PA317-BDNF.用这种复制缺陷性逆转录病毒已成功地感染了NTH/3T3细胞,并表达出有神经营养活性的蛋白质.然后,切断三月龄雄性SD大鼠穹窿海马伞,同时在同侧基底前脑内植入BDNF-PA317细胞.术后6周用Morris水迷宫检测动物空间学习记忆能力.行为学测试后2周内作形态学检测.结果显示,实验组搜寻平台的平均潜伏期明显少于对照组(P<0.01);在原平台所在位置象限的游泳距离明显多于对照组(P<0.05).BDNDcRNA探针原位杂交组织化学研究显示,实验组基底前脑BDNFmRNA的表达明显增强.胆碱乙酰转移酶(ChAT)免疫细胞化学研究显示实验组隔复合体内的ChAT阳性神经元的数目明显增加.胆碱酯酶(AChE)染色表明基底前脑内植入BDNF-PA317细胞可明显增加海马齿状回分子层胆碱能纤维的抽芽.提示在基底前脑内植入BDNF-PA317细胞可促进穹窿切断大鼠空间学习记忆功能的恢复,其机理可能更多还原