ENU诱发xy1E,C57BL/6J转基因小鼠体内基因突变及微核效应的实验研究

【摘要】 目的：用诱变剂乙基亚硝基脲（ Ｅ Ｎ Ｕ） 验证基于ｐ Ｕ Ｃ１１８ Ｎ Ｘ 质粒载体的转基因小鼠用于研究体内基因突变的可行性。方法：用酶切、环化方式从经和未经 Ｅ Ｎ Ｕ 诱变处理的ｘｙ１ Ｅ， Ｃ５７ Ｂ Ｌ／６ Ｊ转基因小鼠脾脏组织 Ｄ Ｎ Ａ 中分离ｐ Ｕ Ｃ１１８ Ｎ Ｘ 质粒载体，使其转化 Ｄ Ｈ１０ Ｂ 宿主菌并铺 Ａｍｐｒ 平板培养后喷洒邻苯二酚溶液，通过菌落黄白颜色不同筛选突变体，并对突变靶基因ｘｙ１ Ｅ 测序分析以确定突变类型和位点。同时取该转基因小鼠外周血及骨髓细胞，观察 Ｅ Ｎ Ｕ 对转基因小鼠微核形成率的影响。结果：（１） 转基因小鼠脾脏组织ｘｙ１ Ｅ 基因自发突变率小于４ ．７９ ×１０ － ５ ，经 Ｅ Ｎ Ｕ（５０ｍ ｇ／ｋｇ ×５） 处理后，脾组织诱发基因突变率为１９ ．８３ ×１０ － ５ ，两者相差显著；（２） Ｅ Ｎ Ｕ 诱发小鼠脾组织基因突变的类型包括颠换（５０ ％ ） 、单／ 双碱基插入（３７ ．５ ％ ）和转换（１２ ．５ ％ ） ；（３） 经 Ｅ Ｎ Ｕ（５０ ｍｇ／ｋｇ ×５） 处理后，转基因小鼠外周血和骨髓细胞的微核率均明显增加，分别为７ ．６ ‰和８ ．８ ‰，与溶剂对照组相比有显著性差异（ Ｐ＜ ０ ．０１） ，表明 Ｅ Ｎ Ｕ 可明显诱发更多还原