使用SYBR Green I/PI双染色法评估细胞培养条件下梅毒螺旋体的活力和毒力

【作者】 丁璇； 刘兆平； 喻涵； 林婷； 高科； 赵飞骏； 张晓红；

【机构】 南华大学衡阳医学院病原生物学研究所/特殊病原体防控湖南省重点实验室；

【摘要】 目的:梅毒螺旋体因其繁殖极端依赖哺乳动物而拥有独特的体外培养体系,但整个过程需要严格注意组织培养细胞的选择和微需氧环境的构建,这妨碍了它在实验室研究中的广泛使用。Tp离体后活性的监测和判定具有挑战性在细胞培养条件下的活性,动力以及对细胞的毒力尚未可知,这极大地阻碍了人们更好地了解这种生物体及其引起的疾病。方法:基于绿色与红色荧光比率的优化SYBR Green I/PI检测法测量梅毒螺旋体活力在灵敏度、准确性、可靠性和速度方面都是良好的。在本文中,我们从新西兰兔睾丸收获新鲜的Tp,利用SYBR1/PI方法快速检测梅毒螺旋体离体后不同时间,不同介质下的活性,数量以及动力百分比,进一步利用细胞增殖实验探究Tp离体后对各种免疫细胞和内皮细胞的毒力。结果:SYBR Green I/PI方法对梅毒螺旋体染色有效,同时在区分活Tp(LTp)与死Tp(DTp)和病原学诊断中具有明显优势。48h时,Tp在FBS,TpCM2,RPMI 1640+10%BI中仍保持70%左右及以上活性。Tp在体外和细胞系共培养48h时,仍表现出良好的毒力。结论:48小时内梅毒螺旋体在细胞培养条件下仍保持较好的活性、运动性和毒力。这项研究为梅毒螺旋体体外各项研究奠定了基础,促进了对这种苛刻生物的生物学的更好理解。更多还原