人乳源细胞外囊泡miRNA的泌乳阶段特异性表达及其与婴儿肠道健康的潜在关系

【作者】 张亚捷； 阮慧娟； 周振精； 冯一； 蔡威；

【机构】 上海交通大学医学院附属新华医院； 上海中医药大学营养系；

【摘要】 目的细胞外囊泡是细胞分泌的纳米级胞外囊泡,可通过递送miRNA调控靶细胞功能。本研究旨在解析初乳/过渡乳与成熟乳人乳源细胞外囊泡miRNA的差异表达谱及其动态变化,探讨其与婴儿肠道健康的潜在关系。方法本研究为单中心前瞻性队列研究,纳入14名健康单胎足月分娩产妇,采集产后1-14天（初乳/过渡乳）及2-7个月（成熟乳）晨起空腹单侧全乳。每组14例样本等量混样后,采用超速离心法提取细胞外囊泡,通过透射电子显微镜观察囊泡形态、纳米颗粒追踪分析测定粒径与浓度,Western blot检测标志蛋白,提取总RNA,采用Illumina NovaSeq 6000进行miRNA测序,通过miRDeep2定量,使用R进行差异表达、GO与KEGG通路富集分析。结果 TEM显示典型双层膜结构,NTA测定初乳/过渡乳组平均粒径为194.2 nm,颗粒浓度1.6×10¹²particles/mL;成熟乳组平均粒径为173.0 nm,颗粒浓度为2.8×10¹²particles/mL。WB验证三阳一阴表达。共鉴定469个已知miRNA,筛选获得128个差异miRNA。GO分析提示差异miRNA靶基因富集于神经元发育（如神经元细胞体、轴突导向）。KEGG分析提示初乳/过渡乳和成熟乳外泌体中差异表达的miRNA显著富集于PI3K-Akt、MAPK、Wnt等信号通路。结论人乳源细胞外囊泡miRNA表达具有泌乳阶段特异性,差异表达miRNA可能通过PI3K-Akt等通路调控代谢相关基因,提示其与婴儿肠道健康可能存在潜在关系。更多还原