绵羊KLRG1生物信息学分析及多克隆抗体制备

【作者】 王宝山； 刘丽萍； 潘婧； 姚万玲； 刘转霞； 王雯慧； 张旺东；

【机构】 甘肃农业大学动物医学院；

【摘要】 试验旨在分析绵羊KLRG1 (Killer cell lectin like receptor G1)的生物学特性。利用多种生物信息学分析工具,挖掘绵羊KLRG1生物学功能。构建p ET-28a-KLRG1重组质粒,通过大肠杆菌DH5α感受态细胞表达重组蛋白并免疫家兔制备多克隆抗体,通过ELISA检测抗体的效价、Western blotting鉴定抗体反应原性、免疫组织化学鉴定抗体特异性。结果显示,绵羊KLRG1基因与山羊的遗传距离最近,与兔遗传距离最远。绵羊KLRG1基因CDS区全长336 bp,编码111个氨基酸,分子量为12709.69 U,属于碱性亲水性蛋白,无跨膜结构与信号肽,主要存在于细胞质内;二级结构预测结果显示与三级结构模型预测结果一致;磷酸化为主要修饰方式,与CDH1、INPP5D、CDH3、PTPN11、FCER1A、MS4A2、LYN、SYK和IL7R蛋白之间存在相互作用;重组表达蛋白具有良好的免疫原性,ELISA检测抗体效价为1:128000,且具有与重组蛋白发生特异性结合的能力,免疫组织化学染色表明抗体在1:1200时具有良好的特异反应性并能用于KLRG1的检测。提示绵羊KLRG1主要通过磷酸化作用活化ITIM基序发挥以免疫抑制为核心的多种生物学功能,且该功能的发挥依赖其内环境如p H等的稳定;通过重组蛋白制备的多克隆抗体具特异性识别表达KLRG1受体阳性细胞的能力。这为进一步研究KLRG1在绵羊免疫抑制效应中的作用机制提供了依据。更多还原