长牡蛎EF-1α基因启动子报告基因载体的构建及转录活性分析

【作者】 于红； 岳晨阳； 李绘娟； 李琪；

【机构】 海水养殖教育部重点实验室,中国海洋大学；

【摘要】 长牡蛎(Crassostrea gigas)具有环境适应能力强、生长快等优点,是世界上养殖范围最广、产量最高的贝类,也是我国海水贝类养殖的主导品种之一。近年来,随着长牡蛎基因组的公布,长牡蛎功能基因组学研究的内容日益丰富。报告基因在动植物基因工程和遗传学研究中具有极为重要的作用,而牡蛎中一直缺乏强启动子启动报告基因。本研究克隆了长牡蛎EF-1α基因启动子序列,以增强型绿色荧光蛋白(Enhanced GreenFluorescent Protein,eGFP))为报告基因,构建含EF-1α基因启动子启动的重组报告基因载体。利用显微注射方法将重组载体导入至长牡蛎受精卵中,结果显示受精卵发育至桑葚期时eGFP开始表达,至D形幼虫阶段,仍表现出较强的荧光信号(图1),说明EF-1α基因启动子具有较高的转录活性。此外,研究结果显示长牡蛎EF-1α基因的第一个内含子序列对于启动子活性至关重要,缺失内含子序列的重组报告基因载体导入长牡蛎受精卵后,无法启动eGFP基因表达。本研究首次获得了长牡蛎强启动子报告基因载体,为长牡蛎基因功能研究及基因工程提供了重要基础和工具。更多还原