靶向EGFRv Ⅲ的CAR-NK细胞在胶质瘤细胞中的抗肿瘤作用：将NK细胞变成癌症免疫治疗的精确工具

【作者】 依日扎提·艾力； 王增亮； 汪永新；

【机构】 新疆医科大学第一附属医院；

【摘要】 目的本研究中我们探索靶向EGFRv Ⅲ的CAR修饰的人外周血来源NK细胞在脑胶质瘤细胞中的特异性杀伤作用及有效性。方法我们团队以往的研究通过多组学测序证实了EGFRv Ⅲ在胶质瘤细胞和胶质瘤干细胞中特异性高表达。本通过Ficoll密度梯度离心法获得人外周血来源NK细胞,并使用慢病毒转染构建靶向EGFRv Ⅲ的CAR-NK细胞,进一步采用实时无标记动态细胞分析(RTCA)及乳酸脱氢酶释放实验(LDH)评价EGFRv Ⅲ-CAR-NK细胞在胶质瘤细胞中的杀伤效果,同时使用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子α、γ干扰素、颗粒酶B以及穿孔素的分泌,间接反应CAR-NK细胞的抗肿瘤活性。结果研究结果显示,胶质母细胞瘤细胞高表达EGFRv Ⅲ,阳性率约为88.50%。流式细胞仪检测人外周血来源NK细胞的纯度为97.9%,并成功构建靶向EGFRv Ⅲ的CAR-NK细胞,流式细胞术检测显示CAR-NK细胞CAR分子表达阳性(70.16±0.41)%,与对照组NK细胞相比,携带U87-EGFRv Ⅲ的细胞具有很强的杀伤作用(P<0.05)。LDH结果也同样显示随着效靶比的增加,靶细胞的裂解率逐渐升高;在效靶比E:T=3:1时,CAR-NK细胞对靶细胞的裂解率显著高于NK细胞,尤其在U87-EGFRv Ⅲ细胞中,CAR-NK细胞的裂解率为(71.41±0.14)%,而NK细胞的裂解率为(43.45±0.81)%,P<0.0001。ELISA结果显示,在CAR-NK与U87-EGFRv Ⅲ共培养组中,TNF-α、IFN-γ、GzmB以及PRF1细胞因子的分泌随着效靶比的增加而增加,与效靶比E:T=1:1相比,E:T=2:1和3:1时细胞因子的释放更多(P<0.001);此外,在U87-EGFRv Ⅲ组中效靶比为3:1时,CAR-NK细胞比NK细胞释放更高水平的细胞因子,差异有统计学意义。结论 EGFRv Ⅲ促进胶质瘤细胞的增殖能力,靶向EGFRv Ⅲ的CAR-NK细胞在EGFRv Ⅲ表达阳性的U87细胞中具有较强的抗肿瘤作用,为胶质瘤的细胞免疫治疗提供一种新的策略。更多还原