林蛙肺线虫的临床分离,病理研究及分子生物学鉴定

【作者】 黄潇航； 贺金峪； 李诗艺； 王诗晨； 唐丹彤； 黄志坚； 殷光文；

【机构】 福建农林大学动物科学学院(蜂学学院)； 福建省动物药物工程实验室；

【摘要】 为探究1例自林蛙肺线虫病的肺线虫感染种类和蛙肺线虫自然感染对肺部的病理损伤影响。采用临床剖检法确诊患有肺线虫病的林蛙,采用传统形态学观察和聚合酶链式扩增反应(PCR)扩增1株分离获得虫株的核糖体间隔转录区ITS部分片段,对采集获得的虫株综合进行生物学鉴定,同时使用H.E染色法制备肺病理切片进行病变观察。[结果]通过临床剖检发现林蛙肺外观出血,肺毛细血管间出血严重,采用灭菌生理食盐水冲洗发现肺腔内存在大量的线虫感染,通过光镜形态学观察分离获得的线虫具有典型的棒状型食道,尾刺等结构特征符合文献记载棒状科线虫的临床特征。H.E病理组织切片结果显示,肺线虫在林蛙肺部的寄生感染导致了炎性浸润,组织出血,肺腔黏膜脱落等症状。通过PCR扩增获得大小约为750bp的阳性条带,产物测序后通过NCBI数据库物种序列比对,DNA Star7.0等分析结果显示,扩增获得的肺线虫与报道的Rhabdias cf.bufonis(KF999609.1),同源性最高,为100%,其次为Rhabdias bufonis.(KF999593.1,99.7%)、Rhabdias engelbrechti.(MG428406.1,99.0%),邻近法进化树结果显示该肺线虫与Rhabdias cf.bufonis聚于一支,与其余棒状线虫类群形成较为明显的分支。结合形态学和分子生物学鉴定结果,确定病蛙感染肺线虫种类为Rhabdias cf.bufonis,多量寄生肺导致肺炎,引起病理损伤,在蛙类人工养殖繁育中应该引起重视并进行相关的驱虫防控。更多还原