旋毛虫Tsp43重组蛋白对小鼠C2C12细胞增殖分化相关因子表达调控的研究

【作者】 郭琨； 刁子洋； 王姗姗； 侯嘉茗； 孔得丽； 张博涵； 王爽； 宋铭忻；

【机构】 东北农业大学动物源性人兽共患病黑龙江省重点实验室；

【摘要】 Tsp43蛋白是旋毛虫肌幼虫α-杆状体分泌的一种与DNaseⅡ酶相似的蛋白,有一个螺旋-环-螺旋(HLH)结构域,该结构域对肌肉分化因子(如MYOD、MYOKIN)的功能至关重要,故推测旋毛虫或许会干扰正常骨骼肌卫星细胞表型的表达。本研究通过体外实验将旋毛虫Tsp43重组蛋白作用于小鼠C2C12细胞系,探究C2C12细胞分化标志物——成肌调节因子(MyoD)和配对盒转录因子7(pax7)的表达变化及细胞周期调节蛋白(Cyclin D1)、细胞周期调节激酶抑制剂p21和信号通路PI3K/AKT/NF-κB的表达变化。通过CCK-8细胞增殖实验,我们证明了Tsp43重组蛋白促进C2C12细胞增殖,且处理6h增殖效果最明显。应用qPCR检测C2C12细胞MyoD、pax7、AKT和Cyclin D1、p21 mRNA表达量的变化,结果显示MyoD、pax7、p21的mRNA表达量均呈显著降低趋势(p<0.05),而AKT和Cyclin D1的mRNA表达量呈显著上升趋势(p<0.05);通过Wstern blot对MyoD、pax7、PI3K、p-AKT、AKT、NF-κB p65、NF-κB p-p65、Cyclin D1、p21蛋白表达水平进行监测,我们发现MyoD、pax7、p21蛋白表达量随Tsp43重组蛋白处理浓度的升高而降低,与此相反PI3K、p-AKT、AKT、NF-κB p65、NF-κB p-p65、Cyclin D1蛋白表达量则呈增加趋势,与qPCR趋势结果一致。以上结果说明:Tsp43蛋白虽然促进C2C12细胞增殖,但却不能使成肌细胞进一步分化成骨骼肌细胞。本研究应用CCK-8、qPCR、Western blot等方法多角度探讨旋毛虫Tsp43重组蛋白对小鼠成肌细胞增殖分化的影响,为今后深入探讨Tsp43蛋白在旋毛虫寄生过程中的作用及保姆细胞形成的分子机制提供理论依据和基础数据。更多还原