微小隐孢子虫钙调蛋白CGD2₈10的表达及功能初步研究

【作者】 赖鹏； 李蕴慧； 尹艳玲； 宋军科； 杨新； 赵光辉；

【机构】 西北农林科技大学动物医学院；

【摘要】 微小隐孢子虫（Cyptosporidium parvum）是一种重要的人兽共患腹泻病原,可感染人和超过240种动物,严重威胁人和动物的健康。通过比较基因组学分析发现,微小隐孢子虫中存在一个由cgd2₈10基因编码的钙调蛋白,前人研究表明该基因的同源基因在顶复门原虫的生长发育中发挥重要作用,推测它可能与微小隐孢子虫的细胞内寄生相关。为此,本研究利用大肠杆菌原核表达系统获得了CGD2₈10重组蛋白,并免疫家兔制备了多克隆抗体;通过实时荧光定量PCR检测了微小隐孢子虫感染HCT-8细胞后不同时间点cgd2₈10基因的表达情况,利用间接免疫荧光观察了该钙调蛋白在子孢子入侵HCT-8细胞中的表达定位,通过体外中和试验检测该钙调蛋白在微小隐孢子虫入侵宿主细胞中的作用。结果发现,CGD2₈10重组蛋白的分子量大小约为26 KDa,制备的兔源多克隆抗体可以有效识别重组蛋白,效价达到1:100000;cgd2₈10基因在微小隐孢子虫感染宿主细胞后36 h达到感染高峰,钙调蛋白CGD2₈10主要分布于子孢子的中部;抗CGD2₈10多克隆抗体的中和效率达到30.69%。本研究发现钙调蛋白CGD2₈10可能参与微小隐孢子虫入侵宿主细胞的过程,为抗隐孢子虫药物和疫苗研究提供了潜在靶标。更多还原