鸡球虫重组蛋白母源免疫效力研究

【作者】 杨旭； 刘晶； 刘群；

【机构】 中国农业大学动物医学院国家动物寄生原虫实验室；

【摘要】 目前鸡球虫病的防控主要依赖于抗球虫药物和活疫苗,新型疫苗的研究能够为球虫病防控提供新的思路和方法。已知禽类的母源抗体能够为后代雏鸡提供免疫保护,同时母源免疫能够简化免疫程序。本研究通过生物信息学分析、原核表达、纯化以及单一蛋白免疫保护实验对柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和堆形艾美耳球虫保护性抗原进行筛选,获得柔嫩艾美耳球虫棒状体蛋白(Et-ROPK-Eten5-A)、柔嫩艾美耳球虫配子体蛋白22(Et-GAM22)、巨型艾美耳球虫配子蛋白56 (Em-GAM56)以及堆形艾美耳球虫3-1E蛋白(Ea-3-1E)。通过大肠杆菌表达系统分别对以上四种蛋白进行表达和纯化,获得相应的重组蛋白。将四种重组蛋白组合后等比例混合,然后与弗氏佐剂1:1混合后,皮下接种24周龄的种鸡(800ul/只)。当免疫三次后,特异性抗体能够在种鸡体内维持11周,在卵黄抗体中维持10周。收集三免后鸡蛋进行孵化,通过间接ELSIA检测不同日龄后代雏鸡体内特异性母源抗体水平,结果表明其能在后代雏鸡体内维持14天。分别对7、14和21日龄的后代雏鸡混合接种1×10~4个柔嫩艾美耳球虫,1.5×10~5个堆形艾美耳球虫以及1.5×10~5个巨型艾美耳球虫孢子化卵囊。接种后7天,统计后代雏鸡的体重变化,肠道病变记分以及卵囊排出量。攻虫结果显示,与未免疫种鸡的后代雏鸡相比,7日龄免疫后种鸡的后代雏鸡体重平均增重率为39.0%,十二脂肠和小肠的病变记分显著降低(p<0.01),以及卵囊排出量减少84.8%(p<0.0001);14日龄免疫后种鸡的后代雏鸡体重平均增重率为38.9%(p<0.01),十二指肠、小肠和盲肠的病变记分显著降低(p<0.05),卵囊排出量减少86.9%(p<0.05)。综述所述,我们利用来自不同种属艾美耳球虫的重组表达抗原组合免疫种鸡,能够为14日龄以内的后代雏鸡提供母源抗体保护,是一种球虫病防控的新型策略。更多还原