弓形虫GRA1蛋白单克隆抗体的制备与初步鉴定

【作者】 吉婧； 朱明哲； 印春生； 单虎； 刘业兵；

【机构】 中国兽医药品监察所； 青岛农业大学；

【摘要】 本研究旨在利用原核表达系统表达弓形虫GRA1蛋白,制备单克隆抗体,用于弓形虫病的诊断及GRA1蛋白功能研究。本研究以弓形虫cDNA为模板,设计引物扩增GRA1基因片段,构建原核表达质粒,转化至大肠埃希氏菌BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG诱导表达。用纯化后的重组蛋白免疫小鼠,筛选单克隆抗体并对其亚型和特异性进行鉴定。结果表明:成功构建了原核表达质粒pET-30a(+)-TG-GRA1;经IPTG诱导目的基因表达,SDS-PAGE结果显示,重组GRA1分子质量约为27 kDa主要以可溶形式存在,且在IPTG终浓度为0.6 mmol/L、28℃诱导表达8 h时,表达量最高;Western blot结果显示重组蛋白GRA1可与犬弓形虫阳性血清特异性结合,表明重组蛋白GRA1具有良好的反应原性;利用该蛋白构建的间接ELISA方法成功筛选出5株单克隆细胞株,分别命名为1B10、1C9、2C3、2C9以及6E6,并对它们的单抗免疫球蛋白进行亚型鉴定,其中2C3、2C9、6E6为IgG1,1B10、1C9为IgM;IFA结果显示单克隆抗体具有良好的反应原性。本研究结果为应用GRA1蛋白及其单抗对弓形虫检测及深入研究奠定了基础。更多还原