血根碱抑制柔嫩艾美耳球虫侵入作用及机制

【作者】 李俊逸； 黄海斌； 王春凤； 杨桂连；

【机构】 吉林农业大学动物医学院；

【摘要】 柔嫩艾美耳球虫（E.tenella）是致病性最强的鸡球虫之一,感染宿主后能够破坏肠道屏障,引发肠道炎症,出现精神不振、血痢等症状,进而导致雏鸡死亡,给全世界养禽行业造成巨大的经济损失。鸡球虫的抗药性日益严重,寻求潜在的抗球虫药物迫在眉睫。血根碱主要存在于白屈菜、紫堇、博落回等罂粟科植物中,具有抗菌、抗肿瘤作用。研究显示,血根碱对多种寄生虫具有杀虫活性,如小瓜虫（I.multifiliis）、指环虫（D.intermedius）、旋毛虫（T.spiralis）等。本研究应用E.tenella子孢子细胞感染模型评价血根碱对球虫入侵的影响,流式细胞术和免疫荧光检测血根碱处理前后E.tenella子孢子活性氧（ROS）、Ca²⁺、线粒体膜电位（MMP）及Caspase-3水平变化。CFSE染色的E.tenella子孢子入侵实验结果显示,血根碱对E.tenella子孢子入侵MDBK有抑制作用,血根碱浓度为1mg/L、5mg/L和10mg/L时,处理组子孢子入侵率显著降低（P<0.001）。为探究血根碱抑制E.tenella入侵的作用机制,使用DCFH-DA活性氧探针、Fluo-4AM钙离子检测探针和GreenNuc Caspase-3活性检测探针标记子孢子,结果显示E.tenella子孢子ROS水平在血根碱浓度为1mg/L、5mg/L和10mg/L时显著升高（P<0.05或P<0.001）;E.tenella子孢子Ca²⁺水平在血根碱浓度为1mg/L和2.5mg/L时显著升高（P<0.05或P<0.001）;E.tenella子孢子Caspase-3水平在血根碱浓度为2.5mg/L、5mg/L时显著上升（P<0.001）。应用JC-1线粒体膜电位（MMP）检测探针标记子孢子,荧光显微镜观察到E.tenella子孢子MMP在血根碱浓度为5mg/L时明显降低。以上结果表明,血根碱能够降低E.tenella子孢子MMP,上调Ca²⁺水平,引发ROS介导的虫体凋亡,从而抑制球虫入侵细胞。更多还原