都柏林沙门菌减毒疫苗候选株构建及其免疫效力评价

【作者】 王蕾； 王福众； 徐正中； 陈祥； 焦新安；

【机构】 扬州大学,江苏省人兽共患病学重点实验室,农业农村部农产品质量安全生物性危害因子(动物源)控制重点实验室,江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心；

【摘要】 都柏林沙门菌（Salmonella enterica serotypeDublin,S.Dublin）是一种重要的人兽共患病原菌,为牛的强适应性菌型,具有较高的侵袭性和致病性。受感染的动物、污染牛肉或消毒不彻底的牛奶及奶制品,是引发人食物中毒的重要的感染源。都柏林沙门菌也是引起犊牛副伤寒的主要病原菌之一。疫苗接种是目前防控沙门菌感染的有效措施之一。将都柏林沙门菌中毒力相关基因敲除构建的沙门菌减毒疫苗候选株,不仅对人和动物的致病力显著降低,且保持了较好的免疫原性。本研究在都柏林沙门菌Sdu189ΔspiC基础上构建了Sdul89ΔspiCΔaroA双缺失株,并对其生物特性和免疫保护进行了评价,为牛副伤寒的预防和控制奠定基础。方法:利用自杀质粒介导的同源重组方法,构建了都柏林沙门菌Sdu189AspiC和Sdu189ΔspiCΔaroA基因缺失株。并用6周龄雌性BALB/c小鼠采取肌肉注射的方式进行了免疫保护性实验,评价了Sdu189ΔspiC和Sdu1 89AspiCΔaroA基因缺失株对小鼠的免疫保护情况。结果:PCR及测序结果表明成功构建了都柏林沙门菌Sdu189ΔspiC和Sdu189ΔspiCΔaroA基因缺失株。与野生株相比,spiC、aroA基因的缺失对生长速率无明显变化,且该缺失株具有良好的遗传稳定性。生化特性鉴定显示,aroA基因的缺失对H₂S的释放能力发生了变化,也显著降低都柏林沙门菌生物被膜形成的能力。小鼠免疫保护实验显示,疫苗候选株可以提供良好的免疫保护,双缺失株Sdu189ΔspiCΔaroA比单缺失株Sdu189AspiC免疫组对于野生株的清除作用具有更显著的作用。同时,对免疫后小鼠的体重增长情况的监测结果显示,缺失株的免疫对小鼠体重的增长没有显著影响。结论:Sdu189AspiCΔaroA缺失株具有成为疫苗的潜力,该疫苗候选株具有优良的安全性,同时能提供良好的保护效力,为都柏林沙门菌减毒活疫苗的研制奠定了基础。更多还原