血清4型禽腺病毒Fiber-1蛋白在昆虫细胞中的表达、纯化及应用

【作者】 隆玉兰； 王伟康； 谢松桦； 谢泉； 穆雅茹； 秦爱建； 叶建强；

【机构】 扬州大学兽医学院禽类预防医学教育部重点实验室江苏省动物预防医学重点实验室； 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心； 扬州大学农业科技发展研究院； 教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室；

【摘要】 近年爆发的由高致病性血清4型禽腺病毒(FAdV-4)感染引起的肝炎-心包积液综合征给国内外养鸡业造成了巨大经济损失,然目前缺乏商品化的检测FAdV-4特异性抗体的血清学诊断技术。Fiber-1蛋白不仅在介导病毒与细胞结合、启动病毒感染中具有重要作用,还可诱导机体产生强烈的免疫应答。为研制灵敏特异的FAdV-4血清学诊断方法,本研究利用杆状病毒表达系统构建了重组杆状病毒rBacmid-Fiber-1,并以镍柱亲和层析法纯化重组病毒感染Sf9细胞裂解液上清中的Fiber-1蛋白,将纯化的重组Fiber-1蛋白作为包被抗原建立检测FAdV-4抗体的间接ELISA方法。研究结果表明,重组杆状病毒rBacmid-Fiber-1感染的Sf9细胞可实现Fiber-1蛋白的高效可溶性表达,分子量约50kDa。基于纯化的重组Fiber-1蛋白构建的间接ELISA方法能够有效的检测出感染FAdV-4或免疫FAdV-4疫苗的鸡群中抗FAdV-4抗体。特异性试验表明所建立的间接ELISA仅与FAdV-4阳性血清反应,而不与所检测的CIAV、AIV-H9、ALV-J、NDV、IBV等禽源病毒以及禽腺病毒的其他血清型(FAdV-1,-2,-3,-5-6,-7,-8,-9,-11)的阳性血清反应。研究发现该间接ELISA的检测灵敏度远远高于间接免疫荧光方法,且与中和抗体水平具有良好的线性关系。综上所述,表达的重组蛋白Fiber-1具有良好的免疫原性及生物学活性,所建立的基于重组蛋白Fiber-1的间接ELISA方法在检测FAdV-4的感染和免疫监控中具有很好的应用价值。更多还原