犬细小病毒黑龙江流行株的分离鉴定与VP2基因遗传进化分析

【作者】 高艳； 张晓； 都兴洋； 蒋烈戈； 涂亚斌； 高宏雷；

【机构】 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所； 哈尔滨维科生物技术有限公司； 广东省黄埔海关技术中心； 新疆兵团第九师畜牧科学研究所；

【摘要】 为了解黑龙江省犬细小病毒(CPV)的流行情况,本研究从黑龙江省哈尔滨市和双城市的宠物医院共收集了10份经胶体金拭子检测为CPV阳性的犬粪便样品,利用F81细胞进行病毒的分离培养,并对分离的病毒经PCR、血凝性试验及病毒分型鉴定和VP2基因的遗传进化分析,并且选取血凝价较高的4株CPV感染杂交幼犬进行了动物回归试验,每天观察各犬的临床症状、测量体温、采肛门拭子,感染后10 d～14 d迫杀各组犬,取其心、肝脏、脾脏、肺脏、肠淋巴及十二指肠和空肠,分别经PCR检测CPV在各脏器的增殖及粪便排毒情况。从动物回归试验的结果中选取了2株致病力较强毒株,再次接种杂交幼犬,按照动物回归试验方法进行强毒验证试验。结果显示,有8株病毒在F81细胞上出现明显的CPE,其中有3株病毒的血凝效价可达1:512;经PCR鉴定表明分离出8株CPV,并分别命名为CPV-HLJ-CX-1、2、3、5、6、7、8、10;病毒的分型鉴定结果表明,分离的8株病毒中有1株为CPV-2b型、3株为CPV-2c型、4株为CPV-2a型;对8株病毒VP2基因的遗传进化分析表明,CPV-HLJ-CX-2、3、8株处于同一分支,与参考病毒如澳大利亚株、日本分离株、四川分离株、北京及吉林延吉分离株亲缘关系较近,而CPV-HLJ-CX-1、5、6、7、10株处于同一分支,与参考株亲缘关系较远,这表明本试验分离的CPV属于两个不同的分支;动物回归试验结果显示,4株CPV感染幼犬后,有2株病毒感染的幼犬出现犬细小病毒病发病症状,CPV在感染犬的心、肝脏、脾脏、肺脏、肠淋巴等脏器均能够复制且有通过粪便排毒现象;强毒验证试验结果表明,感染的幼犬出现CPV的典型临床症状,分离到了2株CPV强毒株。本研究为监测黑龙江地区CPV的遗传变异趋势及其疫苗的研制具有重要意义。更多还原