神经氨酸酶抗体压下流感病毒的变异

【作者】 王飞； 吴锦森； 王娅娟； 万志敏； 邵红霞； 钱琨； 叶建强； 秦爱建；

【机构】 扬州大学教育部禽类预防医学重点实验室； 扬州大学江苏省动物预防医学重点实验室； 扬州大学江苏省人兽共患病重点实验室；

【摘要】 H9N2亚型流感病毒(AIV)对我国养禽业造成了严重的经济损失,同时还参与H5N1亚型和H7N9亚型等高致病性AIV的重组,对食品生产和人类健康都存在巨大威胁。AIV中的神经氨酸酶(NA)同血凝素(HA)一样,长期受疫苗选择压影响,可能已经产生了逃逸抗体的变异。本研究首先利用杂交瘤技术制备了22株分泌针对A/Chicken/Jiangsu/XXM/1999 (XXM) H9N2病毒NA单抗的杂交瘤细胞株。为了检测H9N2流行株NA的抗原变异,我们利用22株NA单抗与实验室自1999年到2019年分离的19株H9N2病毒进行间接免疫荧光反应(IFA)。根据IFA反应结果,22株单抗可以分为以下三组:第一组单抗仅与2000年左右分离的AIV反应,第二组单抗与2012年以前分离的AIV反应,第三组单抗几乎与所有的H9N2病毒反应。经过序列比对、定点突变发现N356D是导致H9N2病毒不与第一组单抗反应的关键变异。逃逸株筛选结果显示,368和369位氨基酸是第二组单抗识别的关键氨基酸。此外,E368N变异在NA活性中心周围形成了一个新的糖基化位点,可能是中和抗体无法识别当前H9N2流行株NA的关键。NA的进化分析显示,N356D、E368N和D369G是2015年后我国H9N2亚型AIV流行毒株的关键标志。值得注意的是,这些变异可能与近几年人感染H9N2亚型AIV病例的增加存在一定相关性。本研究利用针对NA的单抗鉴定出参与流感病毒NA变异的关键氨基酸位点,进一步丰富了对流感病毒神经氨酸酶的抗原结构的研究。更多还原