猪流行性腹泻病毒S1D蛋白的优化表达及其单克隆抗体的制备

【作者】 李洁森； 孙荣航； 邝燕齐； 陈路漫； 刘青； 罗均； 郭霄峰；

【机构】 华南农业大学兽医学院；

【摘要】 [目的]为提高猪流行性腹泻病毒SID蛋白的表达量,制备SID蛋白的单克隆抗体。[方法]优化S1D基因的密码子,构建重组原核表达质粒pET-S1D和pET-ΔS1D,并进行了诱导表达和纯化。将纯化的△S1D蛋白免疫BALB/c小鼠,以制备抗PEDV S1D蛋白的单克隆抗体。[结果]SDS-PAGE和Western-blotting表明,优化后的S1D基因在大肠杆菌中获得了更高效的表达。ELISA显示,腹水与PEDV病毒粒子和纯化后的ΔS1D蛋白反应均呈阳性,与PEDV N蛋白、pET-32a空载蛋白和PRRSV、TGEV、CSFV、PDCoV、SADs 5种病毒粒子反应均呈阴性。腹水与ΔS1D蛋白、PEDV S蛋白反应均有特异性条带,与pET-32a空载蛋白、正常Vero细胞蛋白均无特异性条带出现。IFA显示,腹水及阳性对照组均能使细胞出现特异性绿色荧光信号,而空白及阴性组均未见绿色荧光信号。[结论]经密码子偏嗜性修饰,本研究高效表达了PEDV S1D蛋白,成功制备了一株能够稳定分泌与PEDV S蛋白特异性结合的单克隆抗体的细胞株。S1D单抗的制备为进一步探究PEDV S蛋白抗原表位及蛋白功能的研究提供了良好的基础。更多还原