共表达传染性法氏囊病病毒LX株VP2蛋白及鸡新城疫病毒PX02/3株F蛋白的重组火鸡疱疹病毒的构建

【作者】 江波； 许健； 李永清；

【机构】 北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室； 北京市农林科学院畜禽疫病研究中心；

【摘要】 鸡新城疫(Newcastle disease,ND)、鸡传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)和鸡马立克病(Marek’s disease,MD)均为高度接触性传染病,因其高死亡率对家禽业的健康发展构成严重威胁。新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的表面糖蛋白F蛋白和传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)的VP2蛋白存在多处抗原位点能诱导机体产生中和抗体,使机体产生保护性免疫应答,是开发亚单位疫苗的主要候选蛋白。火鸡疱疹病毒(Herpesvirus,HVT)是常规应用于预防马立克病的异源疫苗,其复制非必需区可容纳较大的外源基因片段的插入不会影响其自身的复制和生物学特性,是理想的活病毒载体。构建表达传染性法氏囊病病毒(IBDV) VP2基因和鸡新城疫病毒(NDV) F基因的重组火鸡疱疹病毒(HVT),进而开发一针三防的重组三联疫苗,在降低生产中疫苗使用成本的同时还可以极大限度的简化免程序。为此本研究利用基因重组技术,在HVT基因组的非必需区UL45-46插入CMV启动子调控下的IBDV LX株的VP2基因表达盒,然后在HVT基因组的非必需区US1-10插入pec启动子调控下的NDV PX02/3株的F基因表达盒,成功构建并拯救出同时表达IBDV和NDV保护性抗原基因的重组HVT病毒(rHVT-VP2-F)。分别以IBDVVP2基因和NDVF基因的特异性引物对重组病毒进行筛选和鉴定,采用抗HVT鸡血清对重组病毒进行空斑染色和计数,以测定重组HVT的病毒滴度。IBDVVP2和NDVF基因能否在重组病毒感染的CEF中表达并获得抗原性蛋白,对其免疫后是否产生保护力至关重要,将rHVT-VP2-F第3代细胞毒感染的CEF进行Western Blot和IFA鉴定,结果显示VP2和F蛋白获得表达。本研究构建的重组病毒,为研究rHVT-VP2-F三联活载体疫苗提供候选病毒株奠定了基础。更多还原