携带PEDV S1抗原表位的乙肝核心抗原病毒样颗粒的构建与鉴定

【作者】 刘如月； 范京惠； 刘涛； 苑军辉； 李清艳； 翟向和； 左玉柱；

【机构】 河北农业大学动物医学院/科教兴农中心； 瑞普(保定)生物药业有限公司； 行唐县动物卫生监督所；

【摘要】 (目的)构建以乙肝核心抗原为载体呈现PEDV S1抗原表位的病毒样颗粒。(方法)本研究通过设计融合PCR将PEDV S1基因中含B细胞表位744YSNIGVCK752的270bp与乙肝核心抗原(HBcAg)的1-74aa连接起来,再用T4连接酶将HBcAg (编码84-144aa)与PET-32a(+)-HbcAg (编码1-74aa)-PEDV S1连接,即将PEDV S1的270 bp插入到HBcAg主要免疫显性区域(MIR),构建重组质粒PET-32a(+)-HBcAg-PEDV S1。将重组质粒转化到感受态细胞BL21(DE3)中,0.5mmol/L IPTG诱导表达6h;经超声裂解后,用His标签蛋白纯化试剂盒纯化HBcAg-PEDVS1重组蛋白,并用尿素浓度梯度法透析法复性重组蛋白,通过SDS-PAGE、Western blot鉴定纯化、复性后的重组蛋白,通过透射电镜检测其形态。(结果)成功构建了重组质粒PET-32a(+)-HBcAg-PEDV S1,并将其在BL21(DE3)中表达,表达蛋白以包涵体形式表达,SDS-PAGE检测,可见大小为43.1 kDa的目的蛋白;Western blot鉴定结果显示,纯化、复性后的重组蛋白能够与PEDV阳性血清发生特异性反应;经过2%磷钨酸负染后透射电子显微镜检测可见大小为30 nm左右的病毒样颗粒结构。(结论)HBcAg-PEDVS1重组蛋白能够自发形成病毒样颗粒,在原核表达中,乙肝核心抗原可以作为载体呈现PEDV S1抗原表位,为今后新型PEDV疫苗的研究提供了思路。更多还原