牛α0干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及抗病毒活性鉴定

【作者】 彭统全； 邵建伟； 张润祥； 曹翀； 马波； 高明春； 王君伟；

【机构】 东北农业大学动物医学学院；

【摘要】 (目的)本研究克隆了牛α0干扰素（BoIFN-α0）成熟肽基因,使其在真核细胞中表达并研究其表达蛋白的活性。（方法）通过PCR方法扩增得到BoIFN-α0成熟肽基因,然后将其连接到含分泌信号肽序列的Pichiapastoris表达载体p PICZαA上,构建重组质粒p PICZαA-BoIFN-α0,重组质粒经Pme?酶切线性化后电转化宿主菌GS115。转化子经100μg/mLzeocin^TM筛选和PCR鉴定,阳性重组菌经甲醇诱导后实现了BoIFN-α0在毕赤酵母系统中的分泌表达。（结果）SDS-PAGE和Westernblot结果显示表达产物分子量约为18k Da和21kDa,推测表达产物发生了一定程度的糖基化。细胞病变抑制试验结果表明,重组BoIFN-α0具有较高的抗病毒活性达到5.72×10⁶U/mg。（结论）这些研究结果为牛IFN-α的更深层次的应用奠定基础。更多还原