类似于哺乳动物CD25的鸡白介素-2受体α链的克隆及其特性鉴定

【作者】 滕巧泱； 吴佳俊； 郭军庆； 申会刚； 周继勇；

【机构】 浙江大学动物预防医学研究所；

【摘要】 白细胞介素-2 (IL-2)对机体免疫系统具有重要的调节作用。IL-2生物学功能的发挥依赖于其在细胞表面的受体分子-白细胞介素-2受体(IL-2R)的调节。通过RT-PCR的方法,本文从鸡脾单个核细胞(SMC)的总RNA中获得了由1027bp组成的鸡白介素-2受体α(chCD25)的cDNA序列。该序列含有一个636bp的开放阅读框,编码由211个氨基酸残基组成的分子量为23.55kDa蛋白多肽。基因组定位预测结果显示,鸡CD25基因位于鸡的第一号染色体,鸡CD25基因的结构由5个exon和4个intron组成。将EcoRI和SalI双酶切的chCD25胞外区基因(exchCD25)克隆至pET28a(+),构建出原核表达载体p28exchCD25。将p28exchCD25转化至感受态E.coli BL21(DE3)中,经SDS-PAGE和Western blot鉴定,确定有38 KDa大小的目的蛋白表达。用纯化的重组鸡CD25胞外区蛋白制备获得相应的单克隆抗体及多克隆抗体,能与conA激活诱导的SMC反应且能抑制IL-2激活T淋巴细胞的增殖。FCM检测经conA刺激的SMC。这些结果证实鸡存在IL-2细胞受体分子,制备的抗chCD25单克隆抗体是研究鸡调控性T细胞生物学功能的有力的工具。更多还原