中国基因Ⅱ型新城疫分离病毒的分子特性

【作者】 秦卓明； 马保臣； 贾强； 何叶峰； 崔治中； 王有令； 徐怀英； 欧阳文军；

【机构】 山东农业科学院家禽研究所； 山东农业大学动物科技学院；

【摘要】 从患病肉鸡、蛋鸡和企鹅中分离到4株新城疫病毒（Newcastle Disease virus,NDV）,蚀斑纯化后,克隆其F和HN基因。按照NDV F基因前374个核苷酸的同源性高低,将上述毒株划分为基因Ⅱ型。F基因氨基酸全长同源性分析表明:LaSota、B1、QE01、JS05、SQZ04和Taxas48之间高度同源,同源率为96.8%～99.6%;而同为基因Ⅱ型的SRZ02野毒与上述毒株的同源性为92.1%～93.1%,显示出基因Ⅱ型NDV毒株内部之间也存在差异。以SQZ04野毒为代表株与不同F基因型的毒株进行氨基酸同源性比较,结果显示:与Ⅰ型代表株Ulster67的同源率为91.7%～93.1%;与Ⅲ型代表株MIY的同源率为88.8%～90.1%;与Ⅳ型代表株Herts33的同源率为90.8%～92.2%;与Ⅴ型代表株Turkey的同源率为87.2%～88.8%;与Ⅵ型代表株PB9601的同源率为88.8%～91.5%;与Ⅵ1型的Indonesia90、Taiwan95、SGM01和GD05等的同源率为87.9%～92.6%;与基因Ⅺ型F48E9的同源率为90.8%～92.2%。进一步证实,上述4种NDV野毒在基因型上属于Ⅱ型。生物学毒力测定表明:蚀斑纯化前后的MDT,ICPI,IVPI等结果基本一致,均属强毒株。但SQZ04、JS05和QE01 3株NDV野毒F多肽氨基酸裂解位点的序列为111GGRQGRL117,与弱毒序列完全相同,这是国内外首次报道具有这一氨基酸序列的强毒野毒株。SRZ03 F多肽氨基酸裂解位点的序列为111GRRQKRF¹¹⁷,与强毒序列完全相同。这是国内外首次显示,NDV的F蛋白裂解位点处的氨基酸基序可能不一定是NDV毒力的必要因子。HN氨基酸同源率比较显示:SQZ04、SRZ03、JS05和QE01与目前分离的强毒株SGM01、Taiwan95等的HN氨基酸高度同源率,高达95.3%～97.3%,显著高于与疫苗株LaSota的同源性87.8%～89.5%。为确保结果的准确性,本研究对分离株分别进行了蚀斑克隆,且对毒株的生物学毒力分别进行了两次测定,重复的结果基本一致,并以生物学实验作为一个毒株毒力评定的最终依据。因此,提醒我们:在注重分子诊断快捷、方便的同时,应特别注重与传统方法的结合,以期得出正确的结论。更多还原