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禽流感(H9N2亚型)酶标抗体的制备及双抗夹心Dot-ELISA检测方法的建立
【作者】 张春杰； 吴庭才； 程相朝； 李银聚； 王臣； 王大军；
【机构】 河南科技大学动物科技学院；
【摘要】 本试验采用AIV灭活油乳苗(H9N2)对AIV非免疫鸡进行接种并获取高免血清,取高免血清采用饱和硫酸铵沉淀法,经过Sephadex G25层析柱提纯后可获得纯度很好的鸡IgG纯品。把提取的IgG应用过碘酸钠法标记辣根过氧化酶(HRP),制备了禽流感酶标抗体(IgG-HRP),利用所提取的AI-IgG和所制备的禽流感酶标抗体按照双抗夹心DotELISA试验的操作步骤,采用方阵法分别摸索包被抗原及酶标抗体的最佳浓度,同时摸索各步反应的时间等最佳反应条件,以建立一种优化的AIV双抗夹心Dot-ELISA检测法。试验结果显示所制备的AI高免血清HI效价为10 2;AI酶标抗体克分子比值为2.45;优化的Dot-ELISA各条件为:包被AI-IgG最佳稀释倍数为1:50;最佳封闭剂为1%牛血清白蛋白;AI酶标抗体最佳稀释倍数为1:100;待检抗原与两种抗体在37℃下作用30分钟。优化后的检测方法可在2个半小时内作出诊断结果,制备好的包被膜在4℃下保存2个月不影响其效果。结果显示,该方法的敏感性比HA试验提高了4倍,与新城疫病毒液、传染性支气管炎及减蛋综合征病毒液无交叉反应。
【关键词】 禽流感；
酶标抗体；
双抗夹心Dot-ELISA；
- 【会议录名称】 中国畜牧兽医学会禽病学分会第十三次学术研讨会论文集
- 【会议名称】中国畜牧兽医学会禽病学分会第十三次学术研讨会
- 【会议时间】2006-10-15
- 【会议地点】中国湖南长沙
- 【分类号】S858.31
- 【主办单位】中国畜牧兽医学会禽病学分会