siRNA干涉禽流感病毒在鸡胚成纤维细胞中基因表达的影响

【作者】 马莉； 岳华； 李定霏；

【机构】 西南民族大学生命科学与技术学院；

【摘要】 根据GeneBank中禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)NP、PA和PB1基因保守区序列设计、合成3个小干扰RNA(Small interference RNA,siRNA)——siRNA-NP、siRNA-PA和siRNA-PB1;将siRNA和转染试剂Silent-fect按1:3(ul:ug)比例混合均匀后在鸡胚成纤维细胞(CEF)中转染,4h后接种AIV。在病毒感染CEF1、2、3h,测定干涉组和阴性对照中AIV NP和PA基因表达水平变化;并在病毒感染CEF6、17、24、48h观察细胞病变和测定细胞培养液中病毒血凝价。结果表明,干涉组siRNA-PA能有效、特异地敲低AIV PA基因的表达,使PA基因的mRNA水平下降最高可达99.7%,而siRNA-NP无法有效地敲低NP基因的表达,仅使NP基因的mRNA水平下降最高仅达29%;血凝变化和细胞病变结果表明,干涉组不影响细胞的病变和病毒的增殖。本试验成功地在鸡胚成纤维细胞中评价了siRNA对AIV基因表达的影响,这将使RNAi技术用于禽流感的防治成为可能和为探讨禽病病毒基因组的功能提供参考。更多还原