禽流感病毒(H5N1)NA基因的克隆及其真核表达载体的构建

【作者】 赵雪丽； 刘新文； 范根成； 岳华； 张志； 李明义；

【机构】 西南民族大学； 河南省兽医防治站； 青岛易邦公司； 农业部动检所流研中心；

【摘要】 本研究克隆了一株鸡源AIV H5N1亚型PQ分离株的NA基因,并对其进行了序列分析。结果表明NA基因开放阅读框架内含有1350个核苷酸,编码449个氨基酸。NA基因与HK156/97、GD1/96)和HKYU822.2/01的核苷酸和氨基酸同源性分别88.3%、97.4%、97.9%和91.5%、92.8%、98.5%。PQ分离株的NA茎部有20个氨基酸的缺失,从而使50、58、63、68位糖基化位点丢失,这与HKYU822.2/01株完全一致。将NA基因定向亚克隆入杆状病毒Bac-to-Bac系统的转移载体pFastBacDual中,经酶切和PCR鉴定为阳性的重组转移载体再转化入含有杆粒和辅助质粒的DH10BacTM菌中,与杆粒DNA在细菌内进行同源重组。以M13为引物,用PCR方法鉴定重组杆粒DNA,结果证明成功构建了表达NA基因的重组杆状病毒表达载体。更多还原