禽流感病毒A/chicken/Guangdong/3/01(H5N1)HA基因的克隆及其真核表达载体的构建

【作者】 赵雪丽； 范根成； 刘新文； 岳华； 张志； 李明义；

【机构】 西南民族大学； 河南省畜牧兽医总站； 青岛易邦公司； 农业部动检所流研中心；

【摘要】 本研究克隆了一株鸡源AIV H5N1亚型PQ分离株的HA基因,并对其进行了序列分析。结果表明HA开放阅读框内含有1707个碱基,编码568个氨基酸,其中HA1 330个氨基酸,HA2 222个氨基酸。HA基因与HK156/97、GD1/96)和HKYU822.2/01的核苷酸和氨基酸同源性分别为96.3%、96.1%、98.2%和96%、97.4%、98.4%,糖基化位点和受体结合位点均变化不大。裂解位点具有多个碱性氨基酸(RERRRKKR),与其它三个HPAIV完全一致。将HA基因定向亚克隆入杆状病毒Bac-to-Bac系统的转移载体pFastBacDual中,经酶切和PCR鉴定为阳性的重组转移载体再转化进入含有杆粒和辅助质粒的DH10BacTM菌中,与杆粒DNA在细菌内进行同源重组。以M13为引物,用PCR方法鉴定重组杆粒DNA,结果证明成功构建了表达HA基因的重组杆状病毒表达载体。更多还原