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H5N1禽流感病毒HA基因在昆虫细胞中的表达及生物活性鉴定
【机构】 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室；
【摘要】 经RT—PCR扩增了1株H5N1亚型禽流感病毒的血凝素基因(HA),将其克隆到pFastBacHTA载体上,经酶切鉴定及测序筛选出阳性重组载体,将其转化DH10Bac感受态细胞与杆状病毒转移载体(bacmid)进行转座,通过蓝白斑筛选获得重组杆状病毒载体,经PCR鉴定得到单一的HA条带。重组杆状病毒载体在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞。通过蛋白质电泳、免疫印迹法、血凝试验和血凝抑制试验分析表明:在sf9昆虫细胞中高效表达了分子量约66Kd的血凝素蛋白,用此蛋白免疫SPF鸡可产生较高效价的抗体,说明该蛋白具有与天然蛋白相似的生物活性。
【基金】 国家“863”计划资助项目(2003AA241110);国家“十五”科技攻关项目(2004BA 519A19-4)
- 【会议录名称】 中国畜牧兽医学会禽病学分会第十三次学术研讨会论文集
- 【会议名称】中国畜牧兽医学会禽病学分会第十三次学术研讨会
- 【会议时间】2006-10-15
- 【会议地点】中国湖南长沙
- 【分类号】S852.65
- 【主办单位】中国畜牧兽医学会禽病学分会