TRIF/RIPK3/MLKL程序性坏死信号通路在LPS诱导的鸡原代肝细胞损伤中的作用研究

【作者】 原亮； 张瑞琛； 刘芳萍；

【机构】 东北农业大学动物医学学院；

【摘要】 目的细菌性疾病是困扰家禽养殖业健康发展的重大问题。LPS是革兰氏阴性菌细胞壁的重要组成部分,可经血液或门静脉侵入肝脏引起组织损伤。程序性坏死是一种既受信号分子调控又具有坏死样形态特征的新型细胞死亡方式,在肝损伤中扮演重要角色。本研究应用LPS诱导鸡原代肝细胞损伤,旨在探讨TRIF/RIPK3/MLKL程序性坏死信号通路在肝细胞损伤中的作用,为进一步研究细菌感染性肝损伤的分子机制奠定理论基础。材料和方法将鸡原代肝细胞分为对照组和LPS组。经LPS (40μg·mL^-1)处理12 h后,检测细胞上清液ALT、AST和LDH活性;采用Annexin V-FITC/PI双染法分析细胞坏死状况;q-PCR法测定细胞炎症因子IL-1β和IL-6 mRNA的表达水平;q-PCR法和Western Blot法检测细胞TRIF/RIPK3/MLKL程序性坏死信号通路相关因子TRIF、RIPK3、MLKL mRNA和蛋白表达及p-MLKL蛋白的水平。结果细胞上清液ALT、AST和LDH活性检测结果显示,与对照组相比,LPS组ALT、AST和LDH活性显著上升（p<0.05或p<0.01）,表明LPS可导致鸡肝细胞损伤。Annexin V-FITC/PI染色结果显示,与对照组相比,LPS组坏死细胞数量明显增多,表明在LPS诱导的鸡肝细胞损伤中发生大量的肝细胞坏死。炎性细胞因子表达水平检测结果显示,与对照组相比,LPS组细胞IL-1β、IL-6 mRNA的表达水平极显著升高（p<0.01）,表明LPS可导致鸡肝细胞的炎症反应。程序性坏死相关因子mRNA表达结果显示,与对照组相比,LPS组肝细胞TRIF、RIPK3、MLKL mRNA的表达水平均极显著升高（p<0.01）。程序性坏死相关因子蛋白表达结果显示,与对照组相比,LPS组细胞TRIF、RIPK3的蛋白表达以及MLKL蛋白的磷酸化水平均极显著升高（p<0.01）,表明LPS可以激活TRIF/RIPK3/MLKL程序性坏死信号通路。结论LPS通过激活TRIF/RIPK3/MLKL程序性坏死信号通路引起鸡原代肝细胞的炎症反应和细胞损伤。更多还原