【作者】 陶苏丹； 陈舒； 洪小珍； 何吉； 朱发明；

【Author】 Tao SD;Chen S;Hong;Ji He;Faming Zhu;

【机构】 浙江省血液中心；

【摘要】 目的人类血小板抗原(HPA)和人类白细胞抗原(HLA)在人群中呈现高度多态性,个体HPA和HLA的差异输注后可以引起产生相应的抗体,与血小板输注无效、输血后紫癜和新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜等临床疾病密切相关。本研究的目的是建立一种使用Luminex微珠技术同时检测HPA-1、HPA-2、HPA-3、HPA-5和HLA抗体的新方法。方法准备商品化的抗血小板膜糖蛋白抗体GPⅡb/Ⅲa(HPA-1、3系统)、GPⅠb/Ⅸ(HPA-2系统)、GPⅠa/Ⅱa(HPA-5系统)、和W6/32抗体(HLA)单克隆抗体,分别与不同luminex微球进行偶联。招募并收集已知HPA-1、HPA-2、HPA-3和HPA-5基因型的血小板,取1·10~7血小板与25uL待检血清或HPA-1a、HPA-3a、HPA-5a等标准阳性血清37℃反应,并提取反应裂解液即待检抗体-血小板膜糖蛋白反应复合物。取10 L已偶联血小板膜糖蛋白的微球,分别加入30ul待检抗体-血小板膜糖蛋白反应复合物裂解液进行反应并上Luminex平台进行检测。将HPA-1a和HPA-3a标准阳性血清连续稀释(稀释至1/1024)评估该检测方法的灵敏度。以含有不同HPA抗体的患者血清样品验证偶联微球检测HPA抗体的特异性。结果建立的Luminex技术能成功检测已知样品中所有的抗体,该方法检测HPA-1a和HPA-3a抗体的灵敏度分别为1:512和1:64。并发现在含有针对HPA和HLA的多种血小板抗体或混合抗体的样品中未观察到交叉反应。44例血小板疾病样本的结果与用MAIPA检测处理的相同样本的结果一致。结论 Luminex微珠结合血小板膜糖蛋白单克隆抗体可成功地应用于同时检测HPA和HLA抗体,并且检测HPA抗体具有较高的灵敏度。更多还原