小分子FLAG标签表达抗菌肽AOD及功能表征

【作者】 赵庆伊； 李园园； 滕达； 杨娜； 郝娅； 毛若雨； 王建华；

【机构】 中国农业科学院饲料研究所基因工程研究室； 农业农村部饲料生物技术重点实验室；

【摘要】 背景:AOD是一种源于北美贻贝的海洋抗菌肽^[1,2]。目前没有AOD重组制备的案例报道。酸性短序列FLAG-tag是一种短肽类融合标签,结构短小仅为1 kDa;与目的蛋白之间含有一个肠激酶切割位点^[3],切除后不影响目的蛋白折叠、生物活性且回收率较常规融合标签（10-30kDa）提高10倍以上。结果:本研究首次使用FLAG标签构建重组表达载体,屏蔽AOD毒性并采用肠激酶切割获得纯品,进行AOD典型成药性指标的表征研究。结果表明,在5-L发酵罐中诱导60h后,发酵上清液总蛋白浓度达587 mg/L;经亲和层析、肠激酶切割后纯化抗菌肽AOD,纯度>93%。重组表达的AOD具有较强的抗菌活性、高稳定性和低毒性。对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、猪链球菌等革兰氏阳性菌的最低抑菌浓度（MIC）为4-8u g/mL。时间剂量杀菌曲线显示,2×和4×MIC AOD在0.5 h内对临床菌株S.epidermidis G-81的杀菌率>99.9%。人工胃液处理4h、人工肠液处理2h后AOD活性不发生改变。生物相容性实验显示128μg/mL AOD的溶血率<0.5%,细胞存活率>83%。更多还原