东方蜜蜂微孢子虫侵染过程中nce-miR-15338及其预测靶基因的表达谱测定

【作者】 王思懿； 陈大福； 郭睿；

【机构】 福建农林大学动物科学学院(蜂学学院)；

【摘要】 东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae专性侵染成年蜜蜂中肠上皮细胞的导致微孢子虫病,给养蜂业造成严重损失。目前,东方蜜蜂微孢子虫的miRNA信息匮乏,nce-miR-15338在东方蜜蜂微孢子虫侵染蜜蜂宿主过程中的表达规律和调控作用不明。本研究对前期鉴定到的nce-miR-15338进行表达和序列验证,预测和分析nce-miR-15338的靶基因,并检测其在东方蜜蜂微孢子虫侵染意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica工蜂过程的表达谱,以期为深入探究nce-miR-15338调控东方蜜蜂微孢子虫侵染的功能及作用机制研究提供参考和依据。通过Stem-loop RT-PCR和Sanger测序验证东方蜜蜂微孢子虫孢子中nce-miR-15338的存在和表达。利用相关软件预测nce-miR-15338的靶基因并进行数据库注释。采用RT-qPCR检测nce-miR-15338及其靶基因在东方蜜蜂微孢子虫侵染过程中的表达谱。Stem-loop RT-PCR和Sanger测序结果显示nce-miR-15338在东方蜜蜂微孢子虫孢子中存在和表达。生物信息学预测结果显示nce-miR-15338共靶向长链脂肪酸连接酶基因LCFAL 2和20s蛋白酶体亚基基因20s PS等16个基因;分别有16、7、8和3个靶基因可注释到Nr、Swiss-Prot、GO和KEGG数据库. RT-qPCR结果显示,相较于接种后1天(1 day post inoculation, 1 dpi),nce-miR-15338的的表达水平在2 dpi极显著上调,在4 dpi,6 dpi和8 dpi的均极显著下调;靶基因LCFAL 2的表达水平在2 dpi,4 dpi,6 dpi和8 dpi皆为极显著下调;类似地,靶基因20s PS在2 dpi,4 dpi,6 dpi和8 dpi的表达水平均为极显著下调。研究结果证实了nce-miR-15338的真实存在和表达,并明确了东方蜜蜂微孢子虫侵染意蜂工蜂过程中nce-miR-15338及其靶基因LCFAL 2和20s PS的表达规律。更多还原