SIRT1抑制SCCPs活化星形胶质细胞的机制研究

【作者】 张子阳； 丁文洁； 赵子轩； 赵新元； 吴启运；

【机构】 南通大学公共卫生学院职业医学与环境毒理学系；

【摘要】 目的探究短链氯化石蜡(SCCPs)对中枢神经系统的影响,阐明SIRT1在SCCPs诱导星形胶质细胞活化模型中的作用及调控机制。材料和方法构建SCCPs小鼠灌胃暴露模型,收集小鼠半脑行石蜡切片,用TUNEL和NeuN双染检测神经元凋亡,尼氏染色观察神经元形态,免疫印迹和免疫组化检测脑组织GFAP、iNOS表达。构建星形胶质细胞(C6)活化模型,用CCK-8法筛选合适的染毒浓度和时间。通过Edu染色、检测细胞周期增值相关蛋白、细胞计数绘制增值曲线等方法检测C6增值情况。收集细胞蛋白,免疫印迹检测GFAP、iNOS和SIRT1蛋白表达。同时用qRT-PCR检测GFAP、iNOS和SIRT1 mRNA表达水平。从转录、蛋白质合成、蛋白质降解角度解析SCCPs调控SIRT1的分子机制最后用免疫沉淀法结合蛋白质谱法寻找与SIRT1相作用的上下游靶分子。结果实验发现,SCCPs暴露可以活化小鼠大脑星形胶质细胞,诱导神经元凋亡。体外C6细胞模型显示SIRT1表达随SCCPs暴露剂量先增加后降低,但SIRT1表达被抑制后,星形胶质细胞活化程度明显加深,说明SCCPs暴露后SIRT1表达增加可能是机体的应激后保护作用。进一步研究发现,SCCPs暴露只上调SIRT1蛋白水平,并未影响SIRT1 mRNA水平。蛋白质稳定性实验发现SCCPs暴露抑制SIRT1的降解,且降低其泛素化水平。更进一步的研究表明,USP10介导SIRT1的泛素化调控。结论 SCCPs能够激活星形胶质细胞,诱发神经元凋亡;同时SCCPs会激活机体保护机制,通过降低SIRT1去泛素化促进其表达上调,在一定程度上抑制星形胶质细胞活化水平。更多还原