YAP/NRP1对肺腺癌细胞辐射抗性的影响及作用机制

【作者】 王铭蔚； 王蕊； 衣峻萱； 魏新锋； 金顺子；

【机构】 吉林大学公共卫生学院国家卫健委放射生物学重点实验室；

【摘要】 目的探讨YAP/NRP1对肺腺癌细胞辐射抗性的影响及作用机制,为肺癌放射治疗提供新靶点。方法首先,给予两种肺腺癌A549和H1299细胞单次6 Gy的X射线照射,重复5次,总剂量30 Gy,剂量率分别为1.02 Gy/min和0.75 Gy/min,建立A549-RR和H1299-RR辐射抗性细胞模型,通过克隆形成、CCK8、细胞形态变化以及流式细胞术对辐射抗性模型细胞进行鉴定。其次,通过qPCR法以及Western Blot法检测两种RR细胞中YAP与NRP1的mRNA和蛋白的表达变化。通过免疫荧光实验和Western Blot法检测两种RR细胞YAP入核情况。构建YAP干扰和过表达质粒,使用细胞瞬时转染实验,在A549和H1299亲本细胞及RR细胞中分别转染干扰和过表达YAP质粒后,通过qPCR法以及Western Blot法检测YAP与NRP1的mRNA和蛋白的表达变化。结果两种肺腺癌细胞连续被照射五次后,与亲本细胞相比,辐射抗性模型细胞集落形成数量明显增多,细胞存活分数增高、细胞形态发生改变、细胞增殖能力增强、细胞周期分布发生改变,说明辐射抗性模型细胞建立成功。与亲本细胞相比,A549-RR和H1299-RR细胞中YAP与NRP1的mRNA(P<0.01)和蛋白表达量均明显增加。检测YAP的入核情况发现,在A549-RR和H1299-RR细胞中YAP核内表达明显增加。在亲本细胞过表达YAP后,A549细胞中NRP1的mRNA(P<0.05)和蛋白表达量减少,H1299细胞中NRP1的mRNA(P<0.05)和蛋白表达量基本不变。而在A549-RR和H1299-RR细胞中过表达YAP后,NRP1的mRNA(P<0.01)和蛋白表达量均明显增加。在亲本细胞和RR细胞中干扰YAP后,NRP1的mRNA(P<0.01)和蛋白表达量均降低。结论辐射促进肺腺癌细胞YAP进入细胞核,进而调控辐射抵抗基因NRP1的表达变化,从而增强细胞的辐射抗性能力。更多还原