5-氮杂2-脱氧胞苷联合曲古抑菌素A对人胃腺癌细胞增殖及其reprimo基因表达的影响

【作者】 唐杨琛； 沈干； 胡世莲； 沈国栋； 程民； 徐婷娟；

【机构】 中国科学技术大学附属第一医院南区干部病房； 安徽省老年医学研究所；

【摘要】 背景和目的全球胃癌的发病率在恶性肿瘤中排名第四,在肿瘤相关死亡率中高居第二,严重危害人类的健康。目前已知抑癌基因异常甲基化不仅参与胃癌的发生发展,与胃癌细胞对化疗药物的敏感性也密切相关。本研究使用5-氮杂2-脱氧胞苷(5-AzadC)、曲古抑菌素A (TSA)单独或联合处理不同分化程度的人胃腺癌细胞株MGC-803 (高分化)、SGC-7901 (中分化)及MKN-45 (低分化),检测药物处理后上述细胞中reprimo基因甲基化程度和mRNA表达水平的变化情况,探讨5-AzadC、TSA单独或联合使用对胃癌细胞生长、抑癌基因甲基化状态及mRNA表达的影响,为探寻新的胃癌化疗方案提供依据。材料与方法采取5-AzadC、TSA单独或联合用药的方式,对不同分化程度的胃腺癌细胞株MGC-803、SGC-7901及MKN-45细胞株进行处理,利用光学显微镜观察两种药物单独或联合处理前后胃癌细胞形态的变化,并利用台盼蓝染色方法测定各组细胞的活率;使用甲基化特异性PCR方法(MSP)检测各组药物处理后三种胃癌细胞株中reprimo基因启动子区甲基化程度;利用RT-PCR方法检测各组药物处理后三种细胞株reprimo基因mRNA表达水平。结果1)无药物处理的情况下,人胃腺癌细胞株MGC-803、SGC-7901、MKN-45形态均为上皮样,呈梭形,伪足多见,5-AzadC、TSA单独或联合处理后,三种细胞均有部分细胞呈多边形,三种细胞株均出现体积增大,核缩小,核浆比减小,并有大量细胞悬浮。单独用药时TSA作用比5-AzadC组作用明显;5-AzadC、TSA联合作用较单独给药作用明显;台盼蓝染色后以对照组细胞数为100%来计算各药物处理组的细胞存活数,两药联合组处理后的细胞存活数较单药少(P<0.05)。2) MSP法检测结果显示,无药物处理情况下,MGC-803、SGC-7901、MKN-45细胞株中reprimo基因启动子区均表现为高甲基化状态;给予5-AzadC、TSA单独或联合处理后,三种细胞株中reprimo基因启动子区的甲基化水平均有所降低,而非甲基化水平升高;联合给药组较单独给药组DNA甲基化水平降低更为明显。3) RT-PCR法检测发现,无药物处理情况下,MGC-803、SGC-7901、MKN-45细胞株中reprimo基因mRNA表达水平较低,5-AzadC、TSA单药或联合处理后,三种细胞中reprimo基因mRNA水平均有所升高;联合给药组较单独给药组reprimo基因mRNA水平升高更为明显(P<0.05)。结论5-AzadC、TSA单独或联合处理人胃腺癌细胞株MGC-803、SGC-7901、MKN-45后,细胞均出现不同程度的形态改变,reprimo基因甲基化程度降低、mRNA表达水平明显升高,两药联合组最为明显,本研究结果为5-AzadC、TSA应用于胃癌临床治疗提供了重要依据。更多还原