多通道实时荧光PCR熔解曲线分析技术快速鉴定临床常见侵袭性真菌

【作者】 温小姿； 陈琼； 尹立华； 吴盛海； 王贤军；

【机构】 浙江中医药大学； 浙江大学附属医院杭州市第一人民院； 杭州千基生物科技有限公司；

【摘要】 目的 :建立多通道实时荧光PCR熔解曲线分析技术快速鉴定临床常见侵袭性真菌。方法:设计筛选真菌内转录间隔区(internal transcribed spacer regions,ITS)通用引物和8种TaqMan探针,优化PCR反应体系及条件,检测真菌菌株及临床分离株,探讨该技术的灵敏度、特异性及重复性。结果 :该技术可检测多种临床常见侵袭性真菌,且与常见的13种病原菌如肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌等不发生交叉反应。白色念珠菌检测灵敏度为0.05pg/μL,解链温度(Melting temperature,Tm)为66.50℃;光滑念珠菌检测灵敏度为0.1pg/μL,Tm值为66.25℃;热带念珠菌检测灵敏度为0.1pg/μL,Tm值为60.15℃;克柔念珠菌检测灵敏度为0.1pg/μL,Tm值为72.15℃;近平滑念珠菌检测灵敏度为0.2pg/μL,Tm值为63.10℃;季也蒙念珠菌检测灵敏度为0.1pg/μL,Tm值为61.84℃;新型隐球菌检测灵敏度为0.1pg/μL,Tm值为65.50℃;曲霉菌检测灵敏度为0.05pg/μL,黄曲霉Tm值为71.50℃,土曲霉、黑曲霉和烟曲霉Tm值为76.80℃。结论 :建立的多通道实时荧光PCR熔解曲线分析技术对检测临床常见侵袭性真菌有较高的敏感性和特异性,可同时检测念珠菌、新型隐球菌、曲霉菌,并能将念珠菌鉴定至种的水平,可为临床提供早期可靠的辅助诊断,并为临床药物治疗提供一定的参考依据。更多还原