人体肠道厌氧菌Akkermansia muciniphila体外培养与PCR测序鉴定

【作者】 何大强； 安瑞； 王贤军；

【机构】 浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院检验科；

【摘要】 目的:体外纯培养人体肠道厌氧菌Akkermansia muciniphila（A.Akkermansia）及PCR测序鉴定,用于研究其代谢作用及影响人体健康的机制。方法:A.Akkermansia ^MucT（ATTC BAA-835）接种于脑心浸液肉汤固体平板培养基（小牛大脑浸剂200g/L,牛心浸剂250g/L,蛋白胨10g/L,葡萄糖2g/L,NaCl 5g/L,Na₂HPO4 2.5g/L,Agar15g/L溶于去离子水,PH7.4）放入无菌厌氧培养箱（10%C02、80%N2和10%H2）中37度培养3-7天。用消毒棉签收集细菌后提取DNA,DNA片段PCR产物电泳鉴定后送一代测序。结果:A.Akkermansia可在脑心浸液平板培养基上生长,厌氧培养72 h后均可长出直径约为0.7 mm的白色菌落.革兰染色镜检革兰氏阴性菌,不产芽孢的椭圆形菌,可以单个生长,也可以成对或成团生长。PCR产物测序后与NCBI数据库中相同菌种的相似度为98%～100%,序列系统进化树分析其显示菌株属于苜蓿属（Verrucomicrobia）的选择的克隆或菌株中的位置。结论:人体肠道厌氧菌A.Akkermansia可以进行体外纯培养,该实验可以作为其代谢作用及影响人体健康的机制研究的基础。更多还原