MiR-22通过抑制MAPK1/Slug/vimentin环路阻滞膀胱癌细胞上皮间充质转化过程

【作者】 许明杰； 李江枫； 王潇； 刘犇； 谢立平；

【机构】 浙江大学医学院附属第一医院；

【摘要】 目的:膀胱癌是最常见的肿瘤之一,其发病率位居所有癌症的第9位。尽管其死亡率近年来逐渐下降,但仍位居所有癌症的第13位,严重影响人民身心健康。膀胱癌的早期转移是患者失去治愈性手术时机的重要原因。MicroRNA(miRNAs)能在转录后翻译水平调控基因的表达,参与调控膀胱癌增殖及转移过程。MiR-22在不同肿瘤中的作用存在分歧,有研究报道miR-22在急性髓系白血病等肿瘤中,可能是重要的抑癌miRNA;同时,一些文献也表明在前列腺癌和乳腺癌中,miR-22可能扮演促癌miRNA的角色。在膀胱癌中,miR-22的表达、功能及相关机制目前仍缺乏系统性的研究。方法:通过对13例临床采集的膀胱癌样本及其配对癌旁膀胱组织样本行qRT-PCR检测,以比较miR-22在膀胱癌组织中与对应癌旁组织中的表达情况。利用Western Blot、CCK-8、RT-PCR、细胞凋亡与细胞周期检测等方法,研究miR-22对于膀胱癌细胞的体外增殖、迁移、侵袭及上皮间充质转化(EMT)过程的影响。通过构建UM-UC-3细胞株裸鼠皮下移植瘤模型,研究miR-22对于膀胱癌细胞的体内增殖及EMT过程的作用。通过生物信息学预测及双荧光素酶报告基因系统的构建,探究miR-22的作用靶点。结果:miR-22在膀胱癌组织中的表达普遍较对应癌旁组织低。上调miR-22的表达能有效抑制膀胱癌细胞的体外增殖、迁移、侵袭及上皮间充质转化(EMT)的过程。动物实验也证明miR-22对于膀胱癌细胞的体内增殖及EMT过程有效抑制作用。同时我们验证了MAPK1和Snail是miR-22的直接靶标。抑制MAPK1的活性能够显著降低膀胱癌细胞的增殖,侵袭和EMT过程;抑制膀胱癌细胞Snail的表达水平有效降低其侵袭和EMT过程。大样本数据统计得出MAPK1和Snail的表达量是膀胱癌患者预后判断的独立风险因子。我们还在膀胱癌背景下发现了一个重要的MAPK1/Slug/vimentin正反馈环路。miR-22可通过直接靶向MAPK1阻断MAPK1/Slug/vimentin环路。结论:我们的研究发现了一个在膀胱癌细胞中调控增殖与EMT过程的miRNA分子—miR-22,并通过一系列的功能和机制研究,为我们理解膀胱癌的增殖和侵袭机制提供了一个新视角,并为miR-22的临床应用打下了有价值的基础。更多还原