前列腺癌组织特异性靶点ABHD2靶向探针的筛选、鉴定与诊断应用

【作者】 陈超； 何路耿； 何华东； 陈晓龙；

【机构】 杭州市第一人民医院； 浙江加州国际纳米技术研究院；

【摘要】 目的:旨在考察人ABHD2 (α/β hydrolase domain containing 2)在不同组织及前列腺癌细胞中的表达水平及性质,研究应用多肽展示库技术筛选ABHD2高结合活性多肽,设计具有肿瘤特异性靶向功能的量子点探针系统,在细胞水平、荷瘤小鼠模型和临床组织样本中实现对ABHD2的靶向结合及诊断显像。探讨以ABHD2作为前列腺癌新的分子标记物,应用肿瘤靶向探针系统用于肿瘤诊断和临床治疗的可行性。方法:首先将人abhd2基因克隆进原核表达体系,表达纯化获得ABHD2蛋白;其次,运用噬菌体展示多肽技术淘选获得ABHD2靶向多肽,经SPR、ITC和免疫荧光结合实验对多肽的靶向性进行表征;同时设计并制备了ABHD2靶向多肽偶联量子点的纳米探针系统,利用小动物活体荧光成像仪观察纳米探针在LnCap荷瘤小鼠中的肿瘤靶向效果;进一步地应用临床组织样本进行免疫组化分析,研究纳米探针在肿瘤诊断中的可行性。结果:(1)Northern blot实验明确了abhd2基因在人不同癌组织水平中的表达差异,发现在前列腺癌、卵巢癌中高表达,具有组织特异性;(2)ABHD2在前列腺癌LNCap细胞中的表达远高于PC-3和DU145细胞,是一个雄激素诱导依赖的细胞膜锚定蛋白;(3)运用噬菌体展示多肽技术筛选获得ABHD2蛋白靶向多肽——SH25,SPR和ITC体外结合和细胞靶向实验证实SH25多肽具有ABHD2高结合活性;(4)成功制备SH25偶联量子点纳米探针(SH25-Qdot),小动物活体成像显示SH25-Qdot能在特异性在LnCap荷瘤小鼠的肿瘤部位富集;(5)SH25-Qdot能用于临床组织水平鉴定ABHD2蛋白表达高低,是潜在的前列腺癌组织免疫组化耐药预后诊断方法。结论:ABHD2蛋白特异性表达在雄激素依赖性前列腺癌的细胞膜上,与肿瘤的增殖、迁移和耐药性密切相关,是一个潜在的药物靶点。SH25靶向多肽,既可作为体内肿瘤的成像制剂表征肿瘤细胞表型,用于肿瘤细胞耐药性的诊断检测,又可进一步与抗癌药物结合进行靶向治疗。更多还原