柑橘黄龙病菌分泌蛋白04580基因的克隆及原核表达

【作者】 邓杰夫； 李魏； 雷玲； 洪艳云； 刘双清； 戴良英； 易图永；

【机构】 湖南农业大学植物保护学院植物病虫害生物学与防控湖南省重点实验室；

【摘要】 柑橘黄龙病(Citrus Huanglongbing,HLB)是由韧皮部杆菌(Candidatus Liberibacter spp.)引起的柑橘上一种毁灭性病害。病原菌难以在人工培养基上培养,包括亚洲种(Candidatus Liberibacter asiaticus,Las)、非洲种(Candidatus Liberibacter africanus,Laf)和美洲种(Candidatus Liberibacter americanus,Lam)。为了进一步了解柑橘黄龙病菌亚洲种Clas的致病机理,从Prasad预测的166种分泌蛋白中选取一个在柑橘植株中已知表达量较高的CLIBASIA-04580基因进行研究。利用CTAB法从感染柑橘黄龙病的柑橘叶片中提取总DNA,以此为模板经PCR扩增CLIBASIA-04580,胶回收PCR产物T-cloning到pET-28a载体上,通过菌落PCR和酶切鉴定筛选阳性克隆,命名为pET28a-04580;转化大肠杆菌BL21 (DE3),经IPTG诱导,表达N-端融合6×His标签的04580重组蛋白,SDS-PAGE电泳检测,分析目的蛋白的表达水平,并利用镍柱进行纯化。结果表明04580蛋白成功表达,IPTG浓度为1.5mmol/L时表达量达到最高,且成功纯化了04580重组蛋白。本研究克隆了柑橘黄龙病菌CLIBASIA-04580基因,构建了原核表达载体pET28a-04580,并且成功表达、纯化了04580重组蛋白,为进一步了解04580的生物学功能及其致病机理提供了基础。更多还原