王草草茎点霉叶斑病病原菌的绿色荧光蛋白基因标记

【作者】 陆英； 何宝霞； 林培群； 贺春萍； 吴伟怀； 梁艳琼； 易克贤；

【机构】 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所农业农村部热带农林有害生物入侵检测与控制重点开放实验室海南省热带农业有害生物检测监控重点实验室； 南京农业大学植物保护学院；

【摘要】 王草(Pennisetum)别称皇草、皇竹草,以象草为母本、美洲狼尾草为父本杂交(Pennisetum purpureum×P.americanum)育种而成。我国于1982年由中国热带农业科学院从哥伦比亚引进,经过多年试种选育而成,后定名为热研4号王草。王草为多年生牧草,具有产量高、生长快、抗倒伏、耐干旱、抗病力强等特点,而且茎叶柔软口感好,营养丰富,以优质、高产而著称,被誉为"草中之王",是各种草食性牲畜和鱼类的优质饲料,适宜在我国热带及亚热带种植。截至目前,热研4号王草已在我国海南、广东、广西、江西、福建、四川、湖南、云南、贵州等省区大面积推广种植。但随着王草种植面积不断扩大,潜在的病害问题日趋严重,严重影响了王草的产量和品质。笔者在广西横县发现王草大面积发生叶斑病,从叶斑病病叶上分离获得1株强致病性菌株,对其完成致病性测定,依据病原形态学特征结合rDNA-ITS序列分析,将其鉴定为草茎点霉菌(Phoma herbarum)。通过溶壁酶酶解菌丝体成功制备草茎点霉菌原生质体,用抗潮霉素基因作为选择标记,采用PEG介导的原生质体转化法,用绿色荧光蛋白表达载体(pCT74-sGFP)转化原生质体,获得表达GFP草茎点霉菌的转化子菌株;转化子菌株在含潮霉素平板上经多次单孢纯化后,在无选择压下连续继代培养仍能发出稳定而强烈的绿色荧光,用GFP特异性引物PCR扩增转化子菌株基因组DNA获得预期大小片段,表明gfp基因已成功导入杧果炭疽病病原菌基因组中,且稳定遗传;GFP标记菌株生长正常,致病性和野生型菌株无明显差别,这为进一步研究该病菌在自然界的生物学及侵染方式奠定了基础。更多还原